A 附 录 A （规范性） 擦拭检测污染的监测体系 A.1 擦拭检测的主要试剂和材料 a) 引物； b) 擦拭检测 PCR 反应液； c) 琼脂糖凝胶； d) 阳性对照：基因组 DNA 或稀释的 PCR 产物。如使用 PCR 产物，将预先扩增的 PCR 产物梯度稀释（1:1000 到 1:1,000,000），检测灵敏度须至少达到 1:10,000。选择强阳性条带的最高稀释度作为擦拭检测的阳性对照品； e) 其他：滤纸或者棉签、镊子、纯水、异丙醇。 A.2 擦拭检测步骤 A.2.1 检测点的确定 DNA提取纯化区、PCR试剂配制区、洁净区实验台、洁净区地面及常用设备，均应进行擦拭检测。 A.2.2 擦拭步骤 a) 镊子用异丙醇去污，并用超纯水清洗，或者使用一次性无菌棉签； b) 用镊子将直径为 1.5 cm 的滤纸片在纯水中浸湿，擦拭 10 cm2的区域； c) 将滤纸或棉签放入 1.5 mL 离心管中，加 120μL
超纯水，漩涡振荡； d) 56℃孵育 1 h，7000 r/min 离心 30 s，4℃保存至使用。 A.2.3 擦拭检测
PCR步骤 a) 将擦拭检测 PCR 反应液加入 PCR 管中，同样将擦拭检测 PCR 反应液加入到在工作区开盖至少一天的 PCR 管中（作为空气中气溶胶污染的检测，即开管阴性对照）； b) 扩增反应包括阳性对照、阴性对照（无 DNA）、擦拭区待检样本、擦拭区掺入样本的阳性对照、开管阴性对照； c) 用实验室标准扩增程序扩增擦拭样本和对照； d) PCR 产物用琼脂糖凝胶电泳进行检测并记录结果； e) 填写实验室污染检测结果记录表，见表 1。 表1 实验室污染检测结果记录表
A.3
污染区处理 应首先用1 mol/L HCl或者10%漂白剂清洗污染区，然后用洁净水彻底清洗干净。在继续进行常规检测前，应重复进行擦拭检测且结果为阴性（除了扩增后区域），污染区处理后的检测结果应记录在案（见表2）。 表2 污染区处理后的检测结果记录表
参 考 文 献 [1] CLSI. Molecular Methods for
Clinical Genetics and Oncology Testing; Approved Guideline. Third Edition. Wayne,
PA: Clinical and laboratory standards institute, 2012 [2] Richards, C., Bale, S., Bellissimo,
D. et al. ACMG recommendations for standards for interpretation and reporting
of sequence variations: Revisions 2007. Genet Med, 2008, 10: 294 –300 [3] ASHI. Standards for Accredited
Laboratories, Approved by CMS. American Society for Histocompatibility and
Immunogenetics, 2019 [4] 《检测和校准实验室能力的通用要求》ISO/IEC 17025: 2017 [5] 《医学实验室质量和能力认可准则》ISO 15189: 2012, IDT [6] 《医疗机构临床基因扩增检验实验室管理办法》（卫办医政发〔2010〕194 号） [7] 《中华人民共和国人类遗传资源管理条例》（中华人民共和国国务院令〔2019〕第 717 号） |
