B.大黄泻下作用与肠道水份和电解质移行的关系 应用Gordon-Chadwick(1979)体内环封法研究了大黄悬液对动物肠道内水份和电解质的移行速度。实验动物ig含10%炭末的4%大黄水悬液0.5ml(0.5/kg体重)，对照动物ig含炭末的水溶液，全部动物于ig后30分钟解剖，测量每只动物消化道中炭末所推进的距离。20只小鼠经大黄悬液ig后，肠道内容物增均推进率为83.2±6.1%，对照动物20只，其平均推进率为67.1±12.2%，两者有十分明显区别(P<0.001)。表明大黄能明显加强小鼠消化道的推进性运动。对肠道内容物排出时间的影响实验，采用大黄水悬液(0.5g/kg)ig后，22只小鼠肠道内容物增均排出时间为139±61min，而对照组5小时还未见排出，两组有十分显着差别(P<0.001)。同时观察到，给药动物均有水样粪便，而对照动物的粪便则较干结。表明大黄能促进胃肠道的推进速度，产生明显的泻下效应。对肠道水份和电解质(Na+、K+)移动速度的影响表明，在盲肠中灌以2%大黄悬液的大鼠，其水份和Na+的净分泌增均值分别为-21.7±12.9ul/(分钟·g)和-7.9±0.8ug当量/(分钟·g)；与对照组的3.6±1.9ul/(min·g)和3.3±0.8ug当量/(分钟·g)比较。P<0.001。而钾离子的净吸收增均值两组比较无显着性差异。表明大黄水溶液(2%)对肠道内水份和钠离子的吸收，即促进水份和钠离子向肠道内迅速移进。实验结果初步证实，大黄的泻下作用与大肠内水份和钠离子分泌直接有关；大黄水液(2%)能明显增强水份和Na+向肠道内移行的速度，大黄泻下作用是由肠道粘膜向肠管内分泌水份所致。 5.1.6大黄致泻作用的近似昼夜节律 健康或病理模型的小鼠对大黄致泻作用反应都有明显的近似昼夜节律。都是晚间给药致泻作用强于日间给药。日间给药致泻ED50较之晚间给药致泻ED50可高达4.89倍(健康鼠)乃至9.69倍(甲亢鼠)。不同病理模型与健康鼠比较也有不同，一般对给于甲状腺粉机能处于兴奋状态的小鼠这一节律趋于明显，变动幅度高于健康鼠，对大黄剂量变化的反应较不敏感；由于投与他巴体使小鼠处于衰弱萎顿状态的小鼠这一节律则趋于不明显，变动幅度低于健康鼠，对大黄剂量变化的反应则较敏感。 5.2大黄对胃肠道的影响5.2.1对动物实验性胃溃疡的影响 Wistar大鼠，采用传统的拘束水浸法略加修改造成动物模型。样品用青海产大黄(R.Palmatum或R.Palmatumvar.Tanguticum)。制成生大黄片、酒炖大黄和大黄炭，并分别粉碎，过60目筛，用蒸馏水配成0.15g/ml悬液。阳性对照用甲氰咪胍。实验观察大黄对应激性胃溃疡的影响(分治疗性给药和预防性给药2种)和大黄对幽门结扎法胃溃疡的影响。实验表明：生大黄、酒炖大黄及大黄炭，在抗体遭受拘束水浸应激性刺激后1-6.5小时给药，虽不能减少出血灶的发生，但均明显地减轻了胃出血程度，显示这3种试剂对粘膜糜烂性胃出血具有良好的止血作用。改变用药方式，于应激实验前3日预防给药，则3种试剂均兼有止血与减少出血灶发生的药效，与甲氰咪胍的影响相仿，提示大黄除止血作用外，若提前应用，对胃粘膜在应激性刺激下发生的病损可预防作用。一些研究指出：应激性胃溃疡的发病机制甚为复杂，它可能涉及中枢、特别是植物神经系统和垂体一肾上腺皮质轴的机能。实验所用的阳性对照药甲氰咪胍系组胺H2受体拮抗剂，能通过阻断组胺的促泌作用，有效地抑制胃酸分泌。鉴于提前服用大黄悬液对大鼠应激性胃溃疡的影响与甲氰咪胍相似，是否意味着可能存在相仿的作用机制。从幽门结扎诱发胃溃疡模型的胃液分析证实：生大黄确有对胃酸分泌的抑制作用，并可降低胃蛋白酶活性；而酒炖大黄对胃酸分泌与胃酶活性均无影响，但在应激实验中却与生大黄具有同样的预防效应。这是否进一步提示：大黄对实验性胃溃疡的预防作用机理还可能涉及到其他不同的发病环节，如对中枢、植物神经系统、微循环等。经对中枢方面的影响作了初步观察，发现大黄对拘束水浸应激8小时的大鼠的低位脑干与间脑部位的5-羟色胺与5-羟哚吲乙酸有激活作用。考虑到大黄还具有解热、镇痛、降压等功能，因此对大黄可能具有的中枢效应不可忽视。 5.2.2对实验性胃溃疡病理形态变化的影响 用Wistam系雄大鼠，制成胃溃疡模型，生大黄(R.Palmatum)制成粉剂用蒸馏水配成15%水剂.结果生大黄粉对应激刺激致大鼠胃溃疡的防治实验中给药组与对照组胃粘膜破坏率(%)分别为0.50±0.27和2.90±1.17(P<0.05)。在镜下观察到的病灶为黄褐色，病变性质属于出血坏死，给药组的动物胃病灶病变范围均局限在胃粘膜浅表层，常常形成蘑菇状突出于粘膜面外，在粘膜内部分很少；对照组的动物胃粘膜出血坏死灶数最多、长度长，且有的深达粘膜2/3以上，其病灶下面及周围表现为出血性灾症。幽门结扎所致胃溃疡。从大体标本所见，溃灶均在前胃，对照组较给药组的病灶多，大且深。在镜个可见对照组的胃病灶多数穿透了胃壁全层。给药组大鼠胃溃疡灶未穿粘膜肌层，苏木精一伊红染色病灶着色为橙色，Perls氏普鲁士兰染为兰绿色，进一步证实为出血坏死。病灶周围为破碎的坏死细胞和多形核白细胞，上皮下疏松结缔组织层高度水肿，大量炎细胞浸润，对照组的尤为严重。 5.2.3对应激性胃溃疡大鼠血浆内cAMP和cGMP的影响 以血浆cAMP和cGMP为指标，通过动物实验观察生大黄和酒炖大黄(均为R.Palmaat)对应激性胃溃疡大鼠植物神经系统功能的影响。结果表明，1、大鼠由应激造成胃溃疡时，血浆cAMP和cGMP均降低，而cGMP下降更为明显，cAMP/cGMP的比值上升，说明植物神经功能紊乱。2、无论生大黄或酒炖大黄对正常大鼠血浆cAMP和cGMP及cAMP、cGMP比值，均无任何影响。3、生大黄对应激大鼠血浆cAMP和cGMP及其比值无影响；而酒炖大黄能使应激大鼠的cAMP下降，cGMP上升，显着降低cAMP/cGMP的比值，使之接近正常。提示酒炖大黄对应激引起的植物神经功能紊乱有一定的调整作用。 5.2.4对实验性胃溃疡大鼠脑内单胺类神经递质的影响 用生大黄和酒炖大黄(R.Pal-matnm或R.Palmatumvar.Tanguticum)粉碎后过60目筛，分别用蒸馏水配成0.15g/ml悬液。用Wistar远交系雄大鼠；体重180g左右，采用传统的拘束水浸应激处理以产生胃溃疡。动物随机分为4组：正常对照组、应激对照组、应激生大黄组、应激酒炖大黄组。正常对照不经水浸应激，后3组均经水浸应激处理，每组动物均为10只。应激酒炖大黄组和应激生大黄组分别用酒炖大黄粉和生大黄粉的蒸馏水悬液ig，水浸应激前先给药3日，每天2次，剂量为0.15g干粉/100g体重(每)。动物水浸后1、4、6.5小时又分别ig给药1次，剂量为0.0175g干粉/100g体重(每次)。正常对照组和应激对照组ig蒸馏水。脑组织内单胺类神经递质含量测定用荧光分光光度计分别以不同波长的激发光和发射光测定它们的荧光强度，按相应的内标准计算含量。实验结果：水浸应激对大鼠脑内单胺类神经递质含量的影响应激对照组端脑内5-HIAA含量为440±22ng/g，比正常对照组的336±17ng/g有明显升高(P<0.05)；而应激对照组低位脑干和间脑内的NE含量分别为451±39ng/g和660±56ng/g，比正常对照组的556±45ng/g和919±59ng/g均有显着下降(P值分别<0.05和<0.001)；应激对照组端脑内DA含量为901±75ng/g，比正常对照组的776±57ng/g明显升高(P<0.05)。除此之外，应激对照组和正常对照组动物比较，其它脑区内的5-HT、5-HIAA、NE和DA水平均未见明显差异。生大黄对应激大鼠脑内单胺类神经递质含量的影响应激生大黄组动物低位脑干内5-HT水平为820±21ng/g，而应激对照组动物为737±23ng/g，两者相差显着(P<0.05)；应激生大黄组动物间脑内5-HI-AA含量为1046±37ng/g，显着高于应激对照的914±42ng/g(P<0.05)。此外，应激生大黄组与应激对照组比较，其它脑区内5-HT、5-HIAA、NE和DA含量未发现有显变化。酒炖大黄对水浸应激大鼠脑内单胺类神经递质的影响应激酒炖大黄组动物间脑内NE含量为530±51ng/g，明显低于应激对照组动物的660±56ng/g。除此之外，其它所观察的脑区内5-HT、5-HIAA、NE和DA均有明显的变化。生大黄和酒炖大黄对正常大鼠脑内单胺类神经递质含量的影响测定了正常对照组、正常生大黄组和正常酒炖大黄组动物低位脑干、间脑和端脑内5-HT、5-HIAA、NE和DA的含量，并将正常生大黄组和正常酒炖大黄组的含量分别与正常对照组进行比较，没有发现生大黄和酒炖大黄对正常大鼠脑内上述4种物质的含量有明显的影响。结果表明，单纯拘束水浸应激大鼠端脑内5-HIAA含量显着升高，低位干和间胃脑内NE含量明显下降，端脑内DA含量也明显升高，说明大鼠拘束水浸应激性胃溃疡的发生与了内NE、DA以及5-HT的代谢可能有密切关系：ig生大黄的应激大鼠低位脑干内5-HT和间脑内5-HIAA的水平明显高于单纯水浸应激大鼠，而ig服酒炖大黄匠应激动物间脑内NE含量比单纯水浸应激动物明显下降。提示低位脑干和间脑内5-羟色胺能系统可能参与生大黄抑制大鼠拘束水浸应激性胃溃疡的发生，而酒炖大黄抑制大鼠，胃溃疡的发生可能与间脑内去甲肾。上腺素能系统月关。同时也说明生大黄与酒炖大黄对大鼠水浸应激性溃疡的抑制作用的机理可能有所不同。因此，通过脑内5-HT或NE系统的调节，减少了胃酸的过量分泌，可能是生大黄或酒炖大黄抑制大鼠的水浸应激性胃溃疡发生的原因之一。生大黄与酒炖大黄对水浸应激性胃溃疡大鼠脑内单胺类神经递质影响的不同，可能是由于不同的炮制方法对它们的药物成分影响不同的缘故。江文君也报道，生大黄对幽门结扎诱发胃溃疡能明显使病损减轻，并使胃液分泌量减少，明显降低胃液游高酸浓度及胃蛋白酶活性，而相同剂量的酒炖大黄则没有明显的影响，也说明生大黄与酒炖大黄药理作用的差异。 5.3胃内吸收动物禁食后，以30%乌拉坦麻醉，大白鼠皮下点滴输入生理盐水，家兔耳缘静脉点滴生理水。结扎幽料管经近贲门处剪口插入胃内，由此管向胃内注入大黄煎液(鼠：20%，2ml/12000g；兔：5O%，50ml/只)膀胱插管导尿。每隔5min接1次尿，记录流出尿量及氨水碱化后尿色变红匠时间。同时另以未结扎动物，ig给同等量水为空白对照；ig给同等量大黄煎液为药物对照。结果：实验组11只大鼠和13只家兔尿中均检出蒽醌反应，药物对照鼠，尿液在给药20分钟时遇碱液变红，实验组鼠自给药至尿中显蒽醌反应最早5、10分钟，平均62.4±70.32min(标准差，后同)；家兔药物对照组最早20-22min，平均27.5±10.6min，实验组最早20-25min，平均37，6±24·71min。显蒽醌应，两者比较(t=1.0360，P>0.10)差异不显着。进一步义观察了家兔尿液中蒽醌含量和组分，分4种处理，ig给水；ig给50%大黄煎液；结扎胃上、下口，直接向胃内注入50%大黄煎液；结扎胃上、下口、十二指肠远端，直接向胃内注入50%大黄煎液。给水或给药后30分钟至60分钟间，接取尿液，记录尿量，经处理后以HPLC法测色尿中等荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚和大黄素甲醚等的含量。结果给药30分钟后的30分钟-60分钟内上消化道吸收的蒽醌类成分量和组分与化道其它部位吸收的大致相同。 5.4食道内吸收观察7只大鼠，自给药计算，至尿液以氨水碱化后变红的时间。结果所观察的7只大鼠，自给药计算，至尿液显蒽醌反应，最早的自导尿管中收集的第一次尿时开始，平均58.6±44·79分钟，家兔1只，尿液于42.44分钟起，呈蒽醌反应。实验证明，大黄煎液在上消化道内不仅开始吸收，而且数量很高，po后有可能在较矩时间内发挥药效。 5.5大黄抑制胃排空的作用以生大黄或熟大黄(酒炖的)水浸煎剂1.5g大黄/1ml/100g体重及20粒琥珀色树脂小球同时胃饲大鼠。所采用的饮片系由西宁大黄(RheumpalmatumL.和R.Palmatumvar.TanguticumMaxim.)炮制而成。喂药后2小时处死动物。统计滞留在胃内的球数。生大黄组?为18.33±0.88粒(n=6)；熟大黄组(P)为15·00±0.94粒(n=6)；对照组?为6.33±0.67粒(n=6)。R与C相比P 5.6大黄对胃蛋白酶消化作用的影响体外实验测定大黄对人工胃液消化蛋白质的影响及与剂量的关系。结果表明大黄具有抑制胃蛋白酶的作用，表现为用药组蛋白消化量减少，且其减少的程度与剂量相关，但对胃液的pH影响，这一作用可能有助于防治溃疡病及其并发出血之症。 5.7大黄对肠管活动的影响生大黄对大鼠离体肠管电活动和收缩活动的影响生药为西宁产掌叶大黄，加工成20%的大黄温浸剂(24小时60℃温浸剂)，实验用0.068g/10g体重剂量观察20只大鼠，以排出不成形状大便为泻下指标。观察泻下作用部位，不同剂量的大黄对结肠电活动的影响等。大黄的泻下作用部位主要在结肠；大鼠离体肠电同其他动物一样，也是由慢波和快波组成，不同的是大鼠离体肠电频率较在体的低。在大黄对结肠的兴奋作用出现后，用温热的台氏液冲洗结肠标本后，在台氏液中加入1×10(-7)的阿托品1ml，然后再加入大黄。结果阿托品可阻断大黄的兴奋效应。 大黄挥发油对动物离体肠管的作用按水蒸气馏法提取的挥发油，加入5倍量阿拉伯胶研磨均匀，以适量蒸馏水配制成1%(100ml含1g大黄挥发油)的大黄挥发油乳剂。动物用家兔(2-2.5kg)、豚鼠(250-350)、小鼠(20±2g)。观察对离体肠管平滑肌的影响和对小鼠小肠蠕动功能的影响。结果：对离体家兔十二指肠及回肠正常收缩，一般在加入药液2-4分钟内即达最大抑制率，表明大黄挥发油对离体肠收缩幅度的影响明显具依赖性，但对其张力和频率的影响并不显着。对乙酰胆碱(Ach)、氯化钡、磷酸组胺(Hist)引起的离体肠痉挛性收缩均有明显对抗作用，且与浓度呈正相关。0.2mg/ml可使BaCl2、Hist性痉挛收缩的抑制率达90%以上。对Ach、BaCl2、磷酸组胺引起的回肠痉挛性收缩，0.2mg/ml大黄挥发油能完全阻断BaCl2的致痉作用，但对Ach及Hist的阻断仅在70%左右(-75)。对小鼠小肠蠕动功能的实验，结果给药组与对照相比，给药组小肠推进率明降低，有非常显着性差异。 5.8对肝、胆的作用5.8.1对肝损伤的保护作用 大黄对实验性肝损伤有明显的保护作用。预先ig大黄6日的家兔im四氯化碳后，不能阻止SGPT的升高，但肝脏坏死程度比对照组轻且动物无死亡发生(对照组死亡30%左右)。有用四氯化碳引起小鼠肝损伤，SGPT高达616.0u/100ml，正常对照组仅为289，经大黄治疗后，SGPT降至325.3u/100ml，肝细胞坏死程度、变性均比纯四氯化碳组轻。亦有报道用D-乙硫氨酸引起大鼠肝纤维化，用组织化学和超微结构的变化来观察大黄的治疗作用，发现大黄能显着递转四氯化碳引起的肝组织中出现的脂滴及纤维化，微粒体肿胀，嵴明显下降，粗面内质网破坏，核糖体显着脱落。也可恢复四氯化碳引起的MAO及琥珀酸脱氢酶的减弱。表明大黄对四氯化碳引起的肝损伤确有预防和治疗作用。 有用家兔进行中毒性肝炎实验，用20%生大黄煎剂1ml/kg药，结果生大黄组家兔死亡数及肝脏显着坏死死的动物只数均较对照组少。 5.8.2大黄治疗急性黄疸型肝炎的作用机理大黄用乙醇加热回流提取，用明胶除鞣质，加0.5%吐温-80，调pH至7.0，加蒸馏水使每1ml相当生药0.5g。观察药物对大白鼠(四氯化碳中毒)血清谷丙转酶活力的影响。结果于实验结束后测走谷丙转氨酶活力(X±SD)。正常照组为289.5±139.7；肝脏损伤对照组为616.0±166.4；大黄治疗组(iv1ml/100g体重，7日)为325.3±143.4。显示有降酶作用，与肝脏损伤组比较有极明显差异(P<0.001)，但与对照组比较P<0.05。病理观察表明大黄治疗组与肝脏损伤组比较，肝细胞变性、坏死均有不同程度的减轻。 5.8.3大黄在体外对乙型肝炎抗原的抑制作用 用20%大黄水煎剂，按1：1比例与不同稀释度的HBAg；抗HBAg抗体；AFP；抗AFP抗体；正常人血清；兔抗和人抗体等6种血清分别作用后。结果大黄对HBAg具有选择性的仰制作用。对兔抗和人抗体尚有一定的抑制。大黄去鞣质后作用消失。单独用鞣酸作用1%水溶液，对HBAg亦有抑制作用，其专一性与大黄基本一致。大黄中的游离大黄蒽醌粗提物，大黄素均无抑制作用。20%以上浓度的大黄水煎剂酒沉液，对HBAg有明显抑制作用。但经明胶除鞣质后，抑制力大为降低；而用蛋清处理后，抑制作用完全消失。 5.8.4大黄蒽醌衍生物对小鼠肝微粒体细胞色素P-450的影响 小鼠连续7日分别ip大黄素、大黄酸和芦荟大黄素42，47，44mg/kg后，使肝微粒体细胞色素P-450含量分别比对照组下降41.7，51.9，66.3%，使戊巴比妥钠诱导的小鼠睡眠时间分别比对照组延长18·7，81.8，64.3%。大黄素、大黄酸、芦荟大黄素、大黄酚和大黄素甲醚结合于氧化态细胞色素P-450的差示光谱均为Ⅱ型光谱。这些结果表明：大黄蒽醌衍生物对细胞色素P-450具还原作用，影响肝脏药物氧化代谢功能。 5.8.5利胆作用大黄(R.Officnale)用水提酒沉法制成200%的注射液，观察对猫和狗的胆汁流量和胆囊活动以及对离豚鼠胆囊活动的影响。实验结果表明，大黄能明显促进肝胆汁的排出，iv给予大黄注射液后，无论狗或猫均能在5-15分钟内胆汁流量增加，8-10分钟最明显，30分钟后才逐渐恢复到用药前水平。这种作用不为阿托品对抗，如将动物预先结扎肝胆管，同样给以大黄注射液，则胆汁流量并无明显增加，离体和在体胆囊实验表明，大黄注射液对胆囊活动无明显影响。表明大黄的利胆作用主要来源于肝胆汁分泌的增加。有报道，大黄促进狗的胆汁分泌，并使胆红素和胆汁酸含量增加。大黄(R·palmatum；R.Palmatumvar.Tanguticum)制成的50%大黄制剂2种(一种为水醇浸提制剂，另一种水煎剂)和大黄的5种提取物(其中大黄3因方法稍异而又分3a、3b两种)临用前均按0·5g/ml生药的剂量蒸馏水配制。结果大黄煎剂组(1ml组)在给药后30分钟内胆汁流量增加，具显着意义(P<0.05)。3个实验组在给药后30或60分钟内胆汁流量增加值均有非常显着的意义(P<0.001)。大黄的5种提取物其利胆效应进行组间差异比较检验，仅大黄1在给药后30分钟内胆汁流量值显着大于其他组(P<0.05)。 |
