5.1.3 生活饮用水采样及检测方法 消毒前、后按GB/T 5750.2、GB/T 5750.12采样和检验，消毒后水样检验时加相应的中和剂，按式(1)计算杀灭率。 5.1.4 污水、污泥采样及检测方法 按照GB 18466执行。 5.1.5 排泄物、呕吐物采样及检测方法 按照《消毒技术规范》（2002 年版）4.7.4.2“排泄物、呕吐物的检测方法”执行。 5.2 物体表面现场模拟评价 5.2.1 菌悬液与载体的制备 5.2.1.1 菌悬液的制备WS/T 797—2022 细菌繁殖体及枯草杆菌黑色变种芽孢ATCC 9372、龟分枝杆菌脓肿亚种CMCC 93326或ATCC 19977、 白色念珠菌ATCC 10231悬液制备分别按照《消毒技术规范》（2002年版）2.1.1.2.3、2.1.1.8.3、2.1.1.9.3和WS/T 683执行。染菌法阳性对照组回收菌量应为5×105 CFU/cm2～5×106 CFU/cm2。 5.2.1.2 载体的制备 按照《消毒技术规范》（2002年版）2.1.1.2.4和WS/T 683所示方法制备。载体应根据消毒对象及消毒因子的特性选择，可选用金属片、玻璃片、棉布片等载体进行染菌，每个菌片的回收菌数应为1×106CFU/片～5×106CFU/片。 5.2.2 方法选择 可选择染菌法或（和）载体法。 5.2.3 布点要求 根据现场情况，选择桌面、地面、墙壁及墙角、书橱、床底、屋顶、抽屉等消毒因子难以到达的地方布点。 5.2.4 试验器材 磷酸盐缓冲液(PBS，0.03mol/L，pH7.2)、稀释液(含0.1%吐温80的PBS溶液)、中和剂、培养基（营养琼脂培养基、胰蛋白胨大豆琼脂培养基、分枝杆菌干燥培养基、沙堡葡萄糖琼脂，麦芽浸膏琼脂等）、无菌棉签、无菌规格板(5.0cm×5.0cm)、无菌平皿等。 5.2.5 试验方法 5.2.5.1 染菌法 5.2.5.1.1 试验步骤 5.2.5.1.1.1 现场消毒组：现场消毒效果评价人员按照生物安全防护级别采取相应的防护措施后进入拟消毒现场，按照布点要求选择现场物体表面较平的部位，于规格板中央空格内用无菌棉签沾以菌悬液均匀涂抹现场实物表面，并予以暗号标记，待自然干燥后由消毒人员进行现场消毒。每类物体布点不少于2个，总布点数量不少于30个。 5.2.5.1.1.2 阳性对照组：另选择与消毒现场相似的环境，与消毒前采样环境对应类别物体另行选择区块人工染菌自然干燥，不进行现场消毒，每类物体至少选择 2 个阳性对照。 5.2.5.1.2 采样及检测方法 消毒完成后，用无菌棉签于含10mL中和剂试管中沾湿，分别对现场消毒组和阳性对照组布点区块进行涂抹采样，每区块横竖往返各5次，以无菌操作方式将棉签采样端剪入原中和剂试管内，振荡混匀，于4h内送实验室进行检测。采样管在混匀器上振荡20s或用力振打80次进一步混匀，适当稀释后，吸取1.0mL接种平皿，每个样本接种2个平皿，加入已溶化的45℃～48℃的相应培养基15mL～18mL，边倾注边摇匀，待琼脂凝固，置36℃±1℃培养，大肠杆菌和白色念珠菌培养48h、龟分枝杆菌脓肿亚种培养1周、细菌芽孢培养72h，计数存活菌落数（CFU/皿）。 5.2.5.1.3 结果计算 按式(2)计算杀灭对数值： KL=N0-N1·····················(2) 式中： KL—杀灭对数值 N0—消毒前样本平均菌落数对数值 N1—消毒后样本平均菌落数对数值 5.2.5.2 载体法 5.2.5.2.1 试验步骤 5.2.5.2.1.1 现场消毒组：现场消毒效果评价人员按照生物安全防护级别采取相应的防护措施后进入消毒现场，将预先制备的 1 片染菌载体置于无菌平皿内，按照布点要求布点于消毒现场，布点数不少于30个，由现场消毒人员进行消毒。 5.2.5.2.1.2 阳性对照组：另取 4 个无菌平皿，分别放入 1 片预先制备的染菌载体，放置于与消毒现场温湿度相似的环境中，不做任何消毒处理，作为阳性对照组。 5.2.5.2.2 采样及检测方法 消毒工作结束后，用无菌方式将现场消毒组和阳性对照组的载体分别取出移入含 5.0mL 中和剂试管中，于4h内送实验室进行检测。在混匀器上振荡 20s 或用力振打 80 次，使载体上的菌被洗脱进入中和剂中，再放置 10min 以上，按照 5.2.5.1.2 的方法计数存活菌落数。 5.2.5.2.3 结果计算 按式(2)计算杀灭对数值。 5.3 生活饮用水现场模拟评价 5.3.1 试验器材 大肠杆菌（8099）、微孔滤膜滤器和滤膜（滤膜孔径为 0.45μm）、抽滤水泵或气泵、恒温水浴箱、品红亚硫酸钠培养基、中和剂（经鉴定合格）。 5.3.2 试验步骤 5.3.2.1 取 36℃±1℃培养 18h～24h 的新鲜大肠杆菌斜面，用稀释液洗下菌苔，适当稀释配制成试验用大肠杆菌悬液。 5.3.2.2 分别取拟消毒水样 3 份，每份 500mL，加入大肠杆菌悬液，混匀，制备染菌水样。每份取适量水样进行过滤，滤完后，再抽气 5s，关闭滤器阀门，用无菌镊子夹取滤膜边缘，移放在品红亚硫酸 钠培养基平板上。滤膜的细菌截留面朝上，滤膜与培养基完全紧贴。将平板倒置，放于 36℃±1℃，培养 48h，计数滤膜上生长的大肠杆菌数，应在 5×102 CFU/100mL～2×103 CFU/100mL。 5.3.2.3 在 3 份染菌水样中分别加入消毒剂，迅速混匀，使其达到拟消毒浓度。消毒至规定时间，每份水样分别移取 2 份，每份 100mL，分别注入装有相应中和剂的无菌三角烧瓶中，以终止消毒作用。然后进行抽滤，方法同消毒前，计数滤膜上生长的大肠杆菌数。 5.3.3 结果报告 消毒后每 100mL 水样中大肠杆菌数（CFU）。 5.4 注意事项 5.4.1 现场评价时，若消毒前采样菌落计数较少导致无法计算杀灭率，应采用现场模拟评价。 5.4.2 发生高致病性传染病时现场模拟评价宜选择载体法，采样时不宜将平皿带出消毒现场，可用无菌镊子将载体直接取出移入试管中进行计数存活菌数，试管架、试管框等现场实验器材底部可铺垫一次性使用的无菌用品，带出现场后立即对所有器材进行消毒。 5.4.3 现场消毒效果评价采样及现场消毒人员应严格按照生物安全防护级别做好个人防护。试验操作应根据有关规定做好防护措施，并在相应生物安全级别的实验室内进行，避免污染环境或感染操作者。 |
