8.2.3
检测步骤 8.2.3.1 检测靶标选择原则 采用双靶标检测，针对开放读码框1ab（open reading frame 1ab，ORF1ab）和核壳蛋白 （nucleocapsid
protein，N）。必要时可根据检测需求和相关规定进行调整。 8.2.3.2 反应体系参照新型冠状病毒核酸检测试剂盒说明书。每个样本设置3个平行。 9
质量控制 9.1富集浓缩质量控制 9.1.1
富集浓缩阳性质量控制 9.1.1.1 将采集到的污水样本灭活后，加入污水中不存在的非人源病毒（如：鼠肝炎病毒、牛冠状病毒、牛呼吸道合胞病毒、新型冠状病毒假病毒等阳性质控），加标浓度为 1 000 copies/mL，作为富集浓缩阳性质控样。富集浓缩阳性质控样检测过程与污水样本检测过程完全相同，但实时荧光 RT-PCR 时应使用相应核酸检测试剂盒。 9.1.1.2 在每一批次检测中应至少做一个富集浓缩阳性质控样。 9.1.2
富集浓缩阴性质量控制 9.1.2.1 样本采集时用无核酸酶水代替污水样本，将其作为富集浓缩阴性质控样。富集浓缩阴性质控样检测过程与污水样本检测过程完全相同。 注：富集浓缩阴性质控样同时也是采样过程空白对照样。 9.1.2.2 在每一批次检测中应至少做一个富集浓缩阴性质控样。 9.2核酸提取质量控制 9.2.1
核酸提取阳性质量控制 9.2.1.1 使用 9.1.1.1 中阳性质控作为核酸提取过程阳性质控样。核酸提取阳性质控样检测过程与污水样本从核酸提取开始的检测过程完全相同，但实时荧光 RT-PCR 时应使用相应核酸检测试剂盒。 9.2.1.2 在每一批次核酸提取过程中应至少做一个核酸提取阳性质控样。 9.2.2
核酸提取阴性质量控制 9.2.2.1 使用无核酸酶水作为核酸提取过程阴性质控样。核酸提取阴性质控样检测过程与污水样本从核酸提取开始的检测过程完全相同。 9.2.2.2 在每一批次核酸提取过程中应至少做一个核酸提取阴性质控样。 9.3
PCR 检测质量控制 9.3.1
PCR 检测阳性质量控制 9.3.1.1 使用新型冠状病毒核酸检测试剂盒中的阳性质控作为 PCR 检测过程阳性质控样。制备反应体系时用 PCR 阳性质控样代替样本核酸加入，其他操作与污水样本 PCR 检测过程完全相同。 9.3.1.2 在每一批次实时荧光 RT-PCR 过程中应至少做一个 PCR 检测阳性质控样。 9.3.2
PCR 检测阴性质量控制 9.3.2.1 使用新型冠状病毒核酸检测试剂盒中的阴性质控作为 PCR 检测过程阴性质控样。制备反应体系时用 PCR 阴性质控样代替样本核酸加入，其他操作与污水样本 PCR 检测过程完全相同。 9.3.2.2 在每一批次实时荧光 RT-PCR 过程中应至少做一个 PCR 检测阴性质控样。 10
结果与报告 10.1实验有效性判断 实验结果应满足表1要求，否则实验视为无效 表1 实验有效性判断标准
10.2结果判定 10.2.1
PCR 结果判断 10.2.1.1 阴性：无 Ct 值、无 S 形扩增曲线。 10.2.1.2 阳性：Ct 值小于或等于新型冠状病毒核酸检测试剂盒说明书规定值，且有 S 形扩增曲线。 注：或以产品说明书为准。 10.2.2
阳性样本判断 10.2.2.1
双靶标：同一份样本中新型冠状病毒 2 个靶标（ORF1ab 和 N）实时荧光 RT-PCR 均出现阳性检测结果，即 2 个靶标的 3 个平行样各出现至少 1 个阳性检测结果，样本判定为阳性，例如：ORF1ab +/-/-，N -/+/-。 10.2.2.2
单靶标：同一份样本中新型冠状病毒单靶标（ORF1ab 或 N）实时荧光 RT-PCR 至少 2 个平行样出现阳性检测结果，样本判定为阳性，例如：ORF1ab +/+/-，N -/-/-或 ORF1ab -/-/-，N +/+/-。当出现单个靶标只有 1 个平行样为阳性检测结果时，需对该样本重新进行富集浓缩和核酸提取，并进行实时荧光 RT-PCR 检测，若仍出现阳性检测结果，则样本判定为阳性。 10.3
结果报告 根据检测结果，报告“检出新型冠状病毒核酸”或“未检出新型冠状病毒核酸”。 11
实验室安全 11.1生物安全 污水样本采集时个人防护要求应符合WS/T 697相关规定。样本灭活、检测等操作应在生物安全二级及以上实验室进行，同时采用不低于生物安全三级实验室的个人防护。水样采集后，富集浓缩、核酸提取和实时荧光RT-PCR检测等所有操作均应避免样本暴露于外环境。实验过程中产生的所有废弃物（包括剩余水样）均应经有效灭菌后再按医疗废弃物进行分类处理。 11.2实验室设备使用安全 离心机应装有不平衡振动显示及报警装置。 | ||||||||||||||||
