(6)将上一步所得溶液和絮状沉淀都加入吸附柱中(吸附柱放入废液收集管中)，8000 rpm/min离心1min,
弃掉废液。 (7)加入500 μL漂洗缓冲液1 (使用前请先检查是否已加入无水乙醇)，8000 rpm/min 离心1min,弃掉废液。 (8)加入500 μL漂洗缓冲液2 (使用前请先检查是否已加入无水乙醇)，最大转速13000rpm /min离心3min,弃掉废液。 (9)将吸附柱放回废液收集管中，最大转速13000rpm /min离心1min,尽量去除漂洗液。 (10)将吸附柱转入一个干净的离心管中(需自己准备，试剂盒中未提供)，加入50μL洗脱缓冲液或灭菌去离子水，室温放置2-5min, 8000rpm/min离心1lmin。收集滤出液，做好标记，4°'C或-20°C (短期)保存备用，-70°C长期保存。 2.核酸检测:实时荧光定量PCR (qPCR)方法检测猴痘病毒核酸(PCR 实验室进行)
(1)反应体系的准备:每孔20μL，加入5μL样本DNA,共计25 μL;每次PCR反应，除了检测样本外，应加无DNA对照(用水代替DNA)、阳性对照;所有样本，包括对照，应设复孔。
(4)仪器检测通道选择:使用荧光定量PCR检测仪,选择Fam荧光信号检测通道，收集设在60°C。具体设置方法请参照各仪器使用说明书。 (5)结果分析阈值设定:使用荧光定量PCR检测仪进行结果分析时，基线取3-10 或6-15个循环的荧光信号，阈值设定原则为阈值线刚好超过正常阴性对照品扩增曲线最高点，也可根据仪器噪音情况调整阈值。 3.核酸检测结果判断 (1) Real time PCR反应系统的质量控制:反应结果应同时符合以下2个条件，否则试验结果无效，应重新开展检测。阴性对照无扩增，为阴性。阳性对照未出现阴性结果。 (2)结果判定: A.阴性:双孔Ct>37, 或无Ct值; B.灰区:一孔Ct值>37; C.阳性:双孔Ct值<37。 所有阳性和处于灰区的样本应重复检测或经序列分析进行确诊。需注意:当样本仅为咽拭子或血清、血浆时，且检测结果为阴性时，应结合临床症状，慎重做出阴性诊断。 4.记录表格 做好荧光定量实时PCR方法检测猴痘病毒核酸原始记录。
附表:猴痘病毒检测样本送检表
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