5.流感病原学相关检查 流感确诊有赖于实验室诊断，检测方法包括病毒核酸检测和抗原检测、病毒分离培养和血清学检测。 流感病毒病原学检测标本的来源主要有：鼻咽拭子、口咽拭子、气管吸引物、痰液、支气管肺泡灌洗液等。有痰的患者优先使用痰液作为标本来源；支气管肺泡灌洗液虽为理想下呼吸道标本，但由于并非常规检查，且仍难以避免受到上呼吸道微生物群的污染，一般不作为常用标本部位；鼻咽拭子及口咽拭子虽为上呼吸道标本来源，但多项研究表明此标本类型在成人流感中有很好的诊断意义，所以对于无法留取下呼吸道标本的患者，结合流行季节、临床表现及影像特征，也可作为病毒性肺炎的病原学诊断依据。 （1）病毒抗原检测（快速诊断试剂检测）。快速抗原检测比较快捷方便，但灵敏度低于核酸检测，结果的解释应结合患者的流行病史和临床症状综合考虑，阴性的筛检结果可能是假阴性，检测结果阴性不能作为排除流感感染的依据，可考虑使用核酸检测进一步确认。快速抗原检测包括胶体金法和免疫荧光法（DFA）两种。胶体金法可进行快速抗原检测，可在 15 分钟内获得检测结果，具有中度的敏感性（50%～70%）及高度特异性（90%），操作简便，是常用的床旁快速 检测方法，可同时区分甲流和乙流感染。但该方法受患者标本采集时间、标本类型及标本质量的影响，而且无法区分病毒亚型/系，需进一步借助核酸检测等手段。 （2）病毒核酸检测。检测患者呼吸道标本（咽拭子、鼻拭子、鼻咽拭子或气管抽取物、痰）中的流感病毒核酸，病毒核酸检测的特异性和敏感性较好，且能快速区分病毒型别和亚型/系，其中实时荧光定量 PCR 方法是目前诊断流感病毒感染的主要手段。对重症患者，检测下呼吸道（痰或气管抽取物）标本更加准确。随着检测技术发展，快速多重 PCR检测已成为流感病毒诊断更为便捷的手段。国外已上市集成式快速 PCR 检测方法试剂盒设备，其检测周期仅为
0.5～2小时，可同时检测甲型和乙型病毒，敏感性及特异性均较高，可用于床旁检测和门诊快检。 （3）病毒培养分离。从呼吸道标本培养分离出流感病毒是流感诊断的金标准。流感病毒可在狗肾、猴肾、人胎肾、牛肾、地鼠肾和鸡胚细胞等原代细胞培养中生长。目前多采用狗肾传代细胞（MDCK 细胞）和鸡胚细胞培养，从呼吸道标本中分离流感病毒。细胞病变因毒株而异，培养结果常用红细胞凝集试验初步判定。病毒培养用时较长，目前主要用于新型流感病毒的鉴定、病毒的变异分析，不作为常规诊断手段。 （4）血清学检测。动态检测 IgG 抗体水平恢复期比急性期呈 4 倍或以上升高有回顾性诊断意义。抗体检测可以用于回顾性调查，但对病例的早期诊断意义不大。单份血清阳性仅能支持流感的诊断，不能作为确诊依据。 （5）测序。流感病毒的序列变异分析依赖于序列测定，包括一代测序和近年来发展的多种深度测序平台技术。测序技术在新亚型流感病毒的确定中发挥主要作用。
附：样本采集、储存和转运规范 1.标本采集 呼吸道标本：包括鼻拭子、咽拭子、鼻咽抽提物、鼻洗液、咽漱液。最佳采集时间为发病后的前 3 天，不超过 7 天。支气管肺泡灌洗液采集依据相关管理规定和诊疗指南由主管大夫确定和采集。 （1）鼻拭子：采集者左手扶住患者的下颌部，右手持无菌拭子轻轻插入鼻道内鼻腭处，停留片刻后缓慢转动退出。以另一拭子擦拭另侧鼻孔。将拭子头浸入采样液中，在采样液中挤压拭子头部数次，用力折断拭子的尾部，将拭子的尾部弃去。 （2）咽拭子：左手用压舌板压住患者的舌头。右手持无菌拭子擦拭双侧咽扁桃体及咽后壁，将拭子头浸入采样液中，在采样液中挤压拭子头部数次，用力折断拭子的尾部，将拭子的尾部弃去。亦可将鼻、咽拭子收集于同一采样管中。 （3）漱口液：用 10mL 生理盐水漱喉。漱时让患者头部微后仰，发“噢”声，让生理盐水在咽部转动。然后，用平皿或烧杯收集洗液。 （4）鼻洗液：让患者取坐姿，头微后仰，用移液管将 5 mL 生理盐水注入一侧鼻孔，嘱患者同时发 K 音以关闭咽腔。然后让患者低头使生理盐水流出，用平皿或烧杯收集洗液。重复此过程洗两侧鼻孔。 （5）鼻咽抽取物：常用于采集气管和支气管分泌物。将真空泵与导尿管相连。将导尿管插入鼻腔与上腭平行，打开真空装置，缓慢做漩涡运动，同样收集另外一个鼻孔。用采样液 3mL 涮洗导尿管。 血常规，血生化和血常规样本常规采样送检即可。 2.标本保存及运输 采集好的标本可在 4℃保存 24 小时，超过 24 小时应该分装保存在-80℃，避免反复冻融。运输应该遵循生物安全样本运输规范，选择有资质的生物样本运输公司用干冰进行运输。运输过程应该符合生物安全管理规定。 （三）影像学表现 并发肺炎者影像学检查可见肺内斑片状、磨玻璃影、多叶段渗出性病灶；进展迅速者，可发展为双肺弥漫的渗出性病变或实变，个别病例可见胸腔积液。 急性坏死性脑病 CT 或 MRI 可见对称性、多灶性脑损伤，包括双侧丘脑、脑室周围白质、内囊、壳核、脑干被盖上部（第四脑室、中脑水管腹侧）和小脑髓质等。 （四）重症病例的高危人群 下列人群感染流感病毒，较易发展为重症病例，应给予高度重视，尽早给予抗病毒药物治疗，进行流感病毒核酸检测及其他必要检查。 1.年龄＜5 岁的儿童（年龄＜2 岁更易发生严重并发症）； 2.年龄≥65 岁的老年人； 3.伴有以下疾病或状况者：慢性呼吸系统疾病、心血管系统疾病（高血压除外）、肾病、肝病、血液系统疾病、神经系统及神经肌肉疾病、代谢及内分泌系统疾病、恶性肿瘤、免疫功能抑制等； 4.肥胖者[体重指数（body mass index，BMI）大于 30，BMI=体重(kg)/身高
(m) 2]； 5.妊娠及围产期妇女。
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