6分析步骤 6.1筛查用混合标准溶液 取混合标准储备溶液（3.11）适量，用50%乙腈溶液（3.3）进行稀释，配制成四氢咪唑啉、萘甲唑啉、羟甲唑啉、安他唑啉、赛洛唑啉浓度为2.5μg/L的筛查用混合标准溶液。 6.2空白基质提取液 称取对应剂型的空白试样0.2g（精确到0.0001g），置于50mL离心管中，与样品同法处理（6.5），作为空白基质提取液。 6.3基质混合标准中间溶液 准确量取混合标准储备溶液（3.11）0.1mL，置于10mL棕色容量瓶中，用空白基质提取液（6.2）稀释至刻度，摇匀，制成四氢咪唑啉、萘甲唑啉、羟甲唑啉、安他唑啉、赛洛唑啉浓度为100μg/L的基质混合标准中间溶液。 6.4基质混合标准系列溶液 分别精密量取基质混合标准中间溶液（6.3）适量，用空白基质提取液（6.2）配制得基质混合标准系列溶液，各组分浓度见表1。基质混合标准系列溶液应现用现配。 表1
四氢咪唑啉等5种组分的基质混合标准系列溶液浓度
6.5样品处理 膏霜乳类、液体类、凝胶类：称取样品0.2g（精确到0.0001 g），置于50mL离心管中，加入饱和氯化钠溶液（3.6）3mL，涡旋30s，分散均匀，准确加入乙腈（3.2）10mL，涡旋30s，超声提取15min，静置至室温，以10000r/min转速离心5min，准确吸取上清液5mL，加水定容至10mL，混匀，经0.22μm滤膜过滤后，滤液作为供试品溶液备用（供试品溶液可根据实际浓度进行适当稀释）。 蜡基类：称取样品0.2 g（精确到0.0001 g），置于50mL离心管中，加入正己烷（3.7）3mL，涡旋30s，分散均匀，准确加入乙腈（3.2）10mL，涡旋30s，超声提取15min，静置至室温，以10000r/min转速离心5min，准确吸取下层乙腈溶液5mL，加水定容至10mL，混匀，经0.22μm滤膜过滤后，滤液作为供试品溶液备用（供试品溶液可根据实际浓度进行适当稀释）。 6.6仪器参考条件 6.6.1色谱条件 色谱柱：C18柱（150 mm×3.0mm，3μm），或等效色谱柱； 流动相：A为含0.1%甲酸（3.8），B为乙腈（3.2）。梯度洗脱程序见表2。 流速：0.3mL/min； 柱温：25℃； 进样量：2μL。 表2
梯度洗脱程序
6.6.2质谱条件 离子源：电喷雾离子源（ESI源）； 监测模式：正离子多反应监测模式（MRM），监测离子对及相关参数设定见表3； 表3
四氢咪唑啉等5种组分监测离子对及相关参数设定
*为推荐的定量离子。 注：当采用不同质谱仪器时，仪器参数可能存在差异，测定前应将质谱参数优化到最佳。 6.7定性判定 取供试品溶液（6.5）和筛查用混合标准溶液（6.1）在相同分析条件下测定，样品中如呈现定量离子对和定性离子对的色谱峰，被测成分的特征离子峰保留时间与筛查用混合标准溶液（6.1）对应的保留时间一致，且选择的监测离子对的相对丰度比与相当浓度的筛查用混合标准溶液（6.1）的监测离子对的相对丰度比的最大偏差不超过表4规定，则可以判定样品中存在对应的组分。 表4
定性确证时相对离子丰度比的最大允许偏差
6.8定量测定 取基质混合标准系列溶液（6.4）依次测定，以待测组分的系列浓度为横坐标，待测组分的峰面积为纵坐标，进行线性回归，绘制基质标准曲线，其线性相关系数应大于0.99。 取供试品溶液（6.5）测定，将对应的定量离子对色谱峰面积代入基质标准曲线。按“7”项下公式，计算样品中待测组分的含量。 6.9平行试验 按以上步骤，对同一样品进行平行试验测定。 6.10空白试验 除不加试样外，均按上述测定条件和步骤进行。
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