五、质量研究与控制
（一）原料药的质量研究
合成多肽原料药的质量研究除参考小分子化学药物的研究思路进行常规项目的研究外，还应根据合成多肽的制备工艺、结构和理化特性等增加一些特定的考察项目，例如氨基酸组成分析、反离子含量等。表 3 列举了合成多肽原料药的质控项目作为参考，仅作为示例展示，并不代表全部情况，应根据产品特性拟定具体考察项目。
表 3 合成多肽原料药的质控项目
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检查项
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注释
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鉴别
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高效液相色谱（HPLC）
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供试品溶液与对照品溶液主峰的保留时间一致，推荐采用等剂量混合进样，应得到单峰
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质谱（MS）
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应在理论值 (单同位素分子量或平均分子量)±1.0 Da 范围内，大于 2kDa 的多肽建议使用高分辨率仪器
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氨基酸组成分析（AAA）
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应明确水解和衍生化方法
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检查
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氨基酸比值
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应明确水解、衍生化方法和计算方法，需开展方法学验证
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反离子含量
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应明确是否存在反离子；根据多肽药物结构中的理论反离子含量在质量标准中拟定合理的上下限范围
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肽相关杂质（或称有关物质）
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应采用杂质对照品进行方法学验证（如工艺杂质、降解杂质、差向肽杂质等），关注方法的专属性
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残留溶剂
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重点关注生产过程中接近终产品工艺步骤所用到的溶剂
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元素杂质
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参考 ICH Q3D 根据风险评估结果对可能引入的元素杂质进行控制
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水分
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多肽通常具有引湿性，水分可能显著影响药物的含量和稳定性，应根据开发过程和稳定性考察的历史批次数据在质量标准中设定水分的可接受标准。
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含量测定
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高效液相色谱（HPLC）
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可参考有关物质/鉴别方法（与对照品比较）
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注：注射用原料药建议对微生物限度和细菌内毒素进行研究。
1、鉴别
多肽药物的鉴别方法应具有专属性，通常采用反相高效液相色谱（RP-HPLC）和质谱法（MS）。此外，还可考虑使用氨基酸组成分析（AAA）、肽图分析或核磁共振波谱（NMR）等不同原理的鉴别方法进行正交确认。
2、氨基酸比值
氨基酸分析数据可用于计算多肽药物的氨基酸比值。氨基酸分析的水解方法可参考相关技术指南进行。通常选择在水解处理中稳定的氨基酸用于多肽的定量研究，此类氨基酸主要有门冬氨酸、谷氨酸、丙氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、赖氨酸和精氨酸。可根据多肽药物的氨基酸序列及不同氨基酸测定方法调整用于定量研究的氨基酸种类。需明确氨基酸比值水解方法和计算方法，同时，应进行相应的分析方法验证工作，证明方法的适用性。
3、杂质
根据化学合成多肽药物的杂质特点，可将其分为肽相关杂质和非肽杂质。
（1）肽相关杂质
肽相关杂质（或称有关物质）是指与目标分子结构有关的杂质，是反映多肽化学纯度的重要指标之一。肽相关杂质可由起始物料引入、生产工艺副反应或长期放置过程中降解产生。表4列举了肽相关杂质的常见类别及来源，仅作为常见示例展示，并不能代表全部情况，应结合产品特性进行评估和分析。
表 4 肽相关杂质的类别及来源
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类别
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描述
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来源
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缺失肽
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缺少一个/多个氨基酸
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合成或降解
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插入肽
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存在一个/多个额外的氨基酸
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起始物料或合成
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错结肽
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存在一个/多个（与目标序列）不同的氨基酸
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起始物料或合成
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差向肽
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存在一个/多个差向异构化的氨基酸
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起始物料，合成或降解
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Asp/Asn相关杂质
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含有门冬氨酸/琥珀酰亚胺的序列
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分别从 Asp 或 Asn 的侧链失去水或氨而环化到主链
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含 β-Asp 的序列
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合成或储存过程中门冬氨酸/琥珀酰亚胺中间体的水解开环
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Asp 立体异构体（非对映异构体）
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门冬酰胺/琥珀酰亚胺中间体差向异构化，然后在合成或储存过程中开环
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断链产物
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合成或储存过程中门冬酰胺/琥珀酰亚胺中间体的完全水解
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焦谷氨酸
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含有 N 端谷氨酰胺或谷氨酸的序列
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合成
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聚合物
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端基具有反应活性或为二硫键改变等引发肽聚合
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合成或降解
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含硫杂质
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巯基氧化 二硫键氧化或还原
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合成或降解
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其他
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谷氨酰胺、门冬酰胺或 C 端的脱酰胺
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合成或降解
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氨基官能团的乙酰化
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合成或降解
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