由于部分肽相关杂质的结构、性质与主成分较为相似，采用单一原理的分析方法可能无法完全分离，推荐采用多种不同原理的检测方法进行有关物质检查。有关物质检查方法除常见的高效液相色谱外，还可考虑使用离子交换色谱、毛细管电泳法等。聚合物检查可采用分子排阻色谱、聚丙烯酰胺凝胶电泳法等。 差向肽类杂质的色谱行为多与主成分非常接近，鉴定和分离难度大。可使用氘代试剂水解多肽（例如氯化氘 (DCl)/氘代水 (D2O)），采用 Marfey 试剂（FDAA）、邻苯二甲醛（OPA）或三氟乙酸酐（TFAA）等对水解后的氨基酸进行衍生，采用相应检测手段测定每个氨基酸手性异构体的含量，判断出肽链中易发生消旋的氨基酸，进一步制备相应的异构体杂质对照品进行针对性研究。 有关物质检查方法学验证过程中应重点关注专属性问题，可选择与目标肽结构相近的工艺杂质和降解杂质对照品进行分离度考察，或采用多肽粗品和强制降解试验样品检验主峰峰纯度。由于多肽一般为末端吸收，采用 DAD 检测器无法有效反映峰纯度，可采用液质联用等方法对主峰峰纯度进行研究。结合有关物质项目中确定的特定杂质，采用相应的杂质对照品进行全面的方法学验证。 本指导原则将肽相关杂质的报告限、鉴定限和质控限分别制定为 0.1%、0.5%和 1.0%。如发现多肽药物杂质存在安全性隐患，应适当收紧杂质限度要求。 （2）非肽杂质 非肽杂质是工艺过程中引入的与目标分子结构不相关的杂质，包括反应试剂和溶剂、金属催化剂、缩合剂等残留物，此类杂质的研究可参照小分子化学药物相关指导原则进行。 多肽药物在合成过程中，需使用不同类型的缩合剂、保护基团等，此类物质在反应过程中可能生成含有警示结构的小分子副产物。应制定合理的控制策略，例如，可采用具有代表性的化合物或接近终产品工艺步骤生成的化合物进行针对性的清除效力研究，以证明采用的分离纯化方式可有效去除相应杂质。 4、含量测定 含量测定是评价多肽质量的重要指标之一，通常在无水、无反离子的基础上进行研究。一般可采用 HPLC 法，通过与对照品进行比较，得到目标多肽占总物质的百分比。若经充分的方法学验证，也可采用其他原理的分析方法。 （二）制剂的质量研究 化学合成多肽制剂的质量研究基本思路和要求可参照小分子化学药物相关指导原则进行，同时提供充分的试验资料。 多肽药物注射剂的质量标准包括但不限于以下项目：性状、鉴别、溶液的澄清度与颜色、pH 值、有关物质、装量/装量差异、可见异物、渗透压摩尔浓度、不溶性微粒、细菌内毒素、无菌、含量测定等。若处方中添加了抑菌剂、抗氧剂等，需对抑菌剂含量、抗氧剂含量进行定量检查。 根据多肽药物的稳定性特征和剂型特点，应重点研究制剂的降解杂质（如脱酰胺、氧化和乙酰化杂质等）、制剂工艺相关杂质（包括原料药与辅料和/或内包材的反应产物等）。另外，为降低不良反应发生率，还应对聚合物进行针对性研究，关注制剂工艺过程、外源因素等的变化对聚合物的影响。 杂质分析方法的选择和相关验证工作可参考原料药部分进行。 六、稳定性研究 合成多肽药物稳定性研究的基本原则应遵循《化学药物（原料药和制剂）稳定性研究技术指导原则（修订）》的一般性要求。结合工艺开发过程中发现的药物不稳定性因素，在稳定性考察中重点关注。 七、参考文献 [1] ICH Q7: Good Manufacturing Practice
Guide for Active Pharmaceutical Ingredients. 2000 [2] ICH Q11: Development and Manufacture of
Drug Substances (Chemical Entities and Biotechnological/Biological Entities).2012 [3] ICH M7 (R1): Assessment and Control of
DNA Reactive (Mutagenic) Impurities in Pharmaceuticals to Limit Potential Carcinogenic
Risk M7. 2017 [4] 原国家食品药品监督管理局.《合成多肽药物药学研究技术指导原则》.2007 年 9 月 [5] 原国家食品药品监督管理局.《化学药物制剂研究基本技术指导原则》.2005 年 3 月 [6] 国家药品监督管理局.《化学药品注射剂仿制药质量和疗效一致性评价技术要求》.2020 年 5 月 [7] FDA Guidance for Industry. ANDAs for
Certain Highly Purified Synthetic Peptide Drug Products That Refer to Listed Drugs
of rDNA Origin. 2021 [8] USP-NF<1503> Quality Attributes
of Synthetic Peptide Drug Substances. [9] USP-NF<1504> Quality Attributes
of Starting Materials for the Chemical Synthesis of Therapeutic Peptides (PF Online). [10] Ph.Eur Substances for Pharmaceutical
use (monograph 2034). |
