4. 粘膜刺激性试验
4.1 眼刺激性试验
通常选兔，每组不少于3只。应设生理盐水对照组，可采用同体左右侧自身对比法。动物眼睛滴入受试物，保证药物充分暴露。给药期限应根据临床拟用方法确定。多次给药时每天给药次数应不少于临床用药频率。
应根据受试物的特点和刺激性反应选择适当的观察时间。通常单次给药为给药后1、2、4、24、48和72小时；多次给药眼刺激试验为每天给药前以及最后一次给药后1、2、4、24、48和72小时。如存在持久性损伤，有必要延长观察期限，一般不超过21天。
一般采用裂隙灯进行眼刺激反应检查，也可根据刺激性反应情况采用其他的合适器械。在整个观察过程中应进行荧光素钠染色检查。每次检查都应记录眼部异常反应，根据表5计算分值。根据表6判断刺激程度。
表5 眼刺激反应分值标准
|
眼刺激反应
|
分值
|
|
角 膜
|
|
|
无混浊
|
0
|
|
散在或弥漫性混浊，虹膜清晰可见
|
1
|
|
半透明区易分辨，虹膜模糊不清
|
2
|
|
出现灰白色半透明区，虹膜细节不清，瞳孔大小勉强可见
|
3
|
|
角膜不透明，虹膜无法辨认
|
4
|
|
虹 膜
|
|
|
正常
|
0
|
|
皱褶明显加深、充血、肿胀，角膜周围轻度充血，瞳孔对光仍有反应
|
1
|
|
出血/肉眼可见坏死/对光无反应（或其中一种）
|
2
|
|
结 膜
|
|
|
充血（指睑结膜和球结膜）
|
|
|
血管正常
|
0
|
|
血管充血呈鲜红色
|
1
|
|
血管充血呈深红色，血管不易分辨
|
2
|
|
弥漫性充血呈紫红色
|
3
|
|
水 肿
|
|
|
无水肿
|
0
|
|
轻微水肿（含眼睑）
|
1
|
|
明显水肿伴部分眼睑外翻
|
2
|
|
水肿至眼睑近半闭合
|
3
|
|
水肿至眼睑超过半闭合
|
4
|
|
分泌物
|
|
|
无分泌物
|
0
|
|
少量分泌物
|
1
|
|
分泌物使眼睑和睫毛潮湿或粘着
|
2
|
|
分泌物使整个眼区潮湿或粘着
|
3
|
|
最大总积分
|
16
|
表6 眼刺激性评价标准
|
分值
|
评价
|
|
0-3
|
无刺激性
|
|
4-8
|
轻度刺激性
|
|
9-12
|
中度刺激性
|
|
13-16
|
重度刺激性
|
4.2 滴鼻剂和吸入剂刺激性试验
可选用兔、豚鼠或大鼠。给药后观察动物全身状况（如呼吸、循环、中枢神经系统）及局部刺激症状（如哮喘、咳嗽、呕吐、窒息等症状）等。单次给药24小时后或多次给药停药后24小时处死动物，观察呼吸道局部（鼻、喉、气管、支气管）粘膜组织有无充血、红肿等现象，并进行病理组织学检查。
4.3 阴道刺激性试验
通常选用大鼠、兔或犬。给药容积可参考临床拟用情况或不同动物种属的最大给药量。给药频率根据临床应用情况，通常每天1~2次，至少7天，每次给药与粘膜接触至少4小时。观察内容：阴道部位、临床表现（如疼痛症状）和阴道分泌物（如血、粘液）等，给药后动物死亡和剖检结果，局部组织有无充血、水肿等现象，并进行阴道和生殖系统病理组织学检查等。
4.4 直肠刺激性试验
4.5 口腔用药、滴耳剂等刺激性试验
可参照上述试验，给药途径为口腔、外耳道给药，观察对口腔和喉粘膜，以及对外耳道和鼓膜等的影响。口腔用药建议用金黄仓鼠，观察受试物对颊粘膜的刺激性。
5．皮肤给药光毒性试验
成年白色豚鼠，雌雄各半。每组动物数至少6只。应设阴性、阳性对照组和受试物不同剂量组，至少包括临床用药浓度。
试验前动物备皮涂敷药物。给药30分钟后覆盖固定，UV光源照射（UVA波长为320-400nm，如含UVB，其剂量不得超过0.1J/cm2）。试验结束后分别于1、24、48和72h观察皮肤反应，根据表7计算评分。单纯涂受试物而未经照射区域未出现皮肤反应，而涂受试物后经照射的区域出现皮肤反应分值之和≥2的动物数≥1只时，判为受试物具有光毒性。
表7 皮肤反应的评分标准
|
红斑和焦痂形成
|
分值
|
水肿形成
|
分值
|
|
无红斑
|
0
|
无水肿
|
0
|
|
非常轻的红斑，勉强可见
|
1
|
非常轻度水肿，勉强可见
|
1
|
|
明显的红斑
|
2
|
轻度水肿（边缘清晰）
|
2
|
|
中度至重度的红斑
|
3
|
中度水肿（皮肤隆起约1mm）
|
3
|
|
重度红斑（鲜红色）至轻度焦痂形成（深层损伤）
|
4
|
重度水肿（皮肤隆起大于1mm，并超过涂受试物的区域）
|
4
|
| 
