5. 取样 取样点的设计对保证试验结果可靠性及药代动力学参数计算的合理性，均有十分重要的意义。通常应有预试验或参考国内外的药代文献，为合理设计采样点提供依据。应用血药浓度测定法时，一般应兼顾到吸收相、平衡相（峰浓度）和消除相。在药物浓度—时间曲线各时相及预计达峰时间前后应有足够采样点，使浓度—时间曲线能全面反应药物在体内处置的全过程。服药前应先取空白血样。一般在吸收相部分取 2-3 个点，峰浓度附近至少需要 3 个点，消除相取 3-5 个点。尽量避免第一个点即为 Cmax，预试验将有助于避免这个问题。采样持续到受试药原形或其活性代谢物 3～5个半衰期时，或至血药浓度为 Cmax 的 1／10～1／20,AUC0-t/AUC0-∞通常应当大于 80%。对于长半衰期药物，应尽可能取样持续到足够比较完整的吸收过程，因为末端消除项对该类制剂吸收过程的评价影响不大。多次给药研究中，对于一些已知生物利用度受昼夜节律影响的药物，则应该连续 24小时取样。 当受试药不能用血药浓度测定方法进行生物利用度检测时，若该药原形或活性代谢物主要由尿排泄（大于给药剂量的 70%），可以考虑尿药法测定，以尿样中药物的累积排泄量来反映药物摄入量。试验药品和试验方案应当符合生物利用度测定要求。尿样的收集采用分段收集法,其采集频度、间隔时间应满足估算受试药原形药或活性代谢物经尿的排泄程度。但该方法不能反映药物吸收速度，误差因素较多，一般不提倡采用。 某些药物在体内迅速代谢无法测定生物样品中原形药物，也可采用测定生物样品中主要代谢物浓度的方法，进行生物利用度和生物等效性试验。 6. 药代动力学参数计算 一般用非房室数学模型分析方法来估算药代动力学参数。用房室模型方法估算药代参数时，采用不同的方法或软件其值可能有较大差异。研究者可根据具体情况选择使用，但所用软件必须经确证并应在研究报告中注明所用软件。在生物等效性研究中，其主要测量参数 Cmax 和 Tmax 均以实测值表示。AUC0→t 以梯形法计算，故受数据处理程序影响不大。 7. 研究过程标准化 整个研究过程应当标准化，以使得除制剂因素外，其他各种因素导致的体内药物释放吸收差异减少到最小，包括受试者的饮食、活动都应控制。试验工作应在 I 期临床试验观察室进行。受试者应得到医护人员的监护。受试期间发生的任何不良反应，均应及时处理和记录，必要时停止试验。 （三）数据处理及统计分析 1. 数据表达 BA 和 BE 研究必须提供所有受试者各个时间点受试制剂和参比制剂的药物浓度测定数据、每一时间点的平均浓度（Mean）及其标准差（SD）和相对标准差（RSD），提供每个受试者的浓度—时间曲线（C-T 曲线）和平均 C-T 曲线以及 C-T 曲线各个时间点的标准差。不能随意剔除任何数据。 脱落者的数据一般不可用其他数据替代。 2. 药代动力学参数 2.1 单次给药的 BA 和 BE 研究，提供所有受试者服用受试制剂和参比制剂的 AUC0→t，AUC0→∞、Cmax、Tmax、t1/2、CL、Vd、
F 等参数及其平均值和标准差。 Cmax 和 Tmax 均以实测值表示。AUC0→t以梯形法计算；AUC0→∞按公式计算：AUC0→∞＝AUC0→t＋Ct/λ z（t
为最后一次可实测血药浓度的采样时间；Ct为末次可测定样本药物浓度；λ z系对数浓度-时间曲线末端直线部份求得的末端消除速率常数，可用对数浓度-时间曲线末端直线部分的斜率求得；t1/2用公式 t1/2＝0.693／λz 计算）。 以各个受试者受试制剂（T）和参比制剂（R）的 AUC0→t按下式分别计算其相对生物利用度（F）值： 当受试制剂和参比制剂剂量相同时：F＝AUCT／AUCR×100％ 受试制剂和参比制剂剂量不同时，若受试药物具备线性药代动力学特征，可按下式以剂量予以校正：F＝【AUCT×DR／AUCR×DT】 ×100％（AUCT、AUCR分别为 T 和 R 的 AUC；DR、DT分别为 T 和 R 的剂量）。 2.2 对于多次给药的 BA 和 BE 研究，提供受试制剂和参比制剂的三次谷浓度数据（Cmin），达稳态后的 AUCss Css-max、Css-min 、T
ss-max、t1/2 、F、DF
等参数。当受试制剂与参比制剂剂量相等时，F 值按下式计算： F＝AUCss T／AUCss
R×100％（式中 AUCss T和 AUCss R分别为 T 和 R 稳态条件下的 AUC） 3. 统计分析 3.1 对数转换 评价 BE 的药代动力学参数 AUC0→t和 Cmax 在进行等效性检验前必须作对数转换。当数据有偏倚时经对数转换可校正其对称性。此外,统计中数据对比宜用比值法而不用差值法,通过对数转换,可实现将均值之比置信区间转换为对数形式的均值之差的计算。 3.2 等效判断标准 当前普遍采用主要药代参数经对数转换后以多因素方差分析（ANOVA）进行显著性检验，然后用双单侧 t 检验和计算 90％置信区间的统计分析方法来评价和判断药物间的生物等效性。 方差检验是显著性检验，设定的无效假设是两药无差异，检验方式为是与否，在 P<0.05 时认为两者差异有统计意义，但不一定不等效；P>0.05时认为两药差异无统计意义，但 P>0.05 并不能认为两者相等或相近。在生物利用度试验中，采用多因素方差分析（ANOVA）进行统计分析，以判断药物制剂间、个体间、周期间和服药顺序间的差异。在生物等效性实验中，方差分析可提示误差来源，为双单侧 t 检验计算提供了误差值（MSE）。 双单侧 t 检验及（1－2α）%置信区间法是目前生物等效检验的唯一标准。双向单侧 t 检验是等效性检验，设定的无效假设是两药不等效，受试制剂在参比制剂一定范围之外，在 P<0.05 时说明受试制剂没有超过规定的参比制剂的高限和低限，拒绝无效假设，可认为两药等效。（1－2α）%置信区间是双单侧 t 检验另一种表达方式。其基本原理是在高、低 2 个方向对受试制剂的参数均值与高低界值之间的差异分别作单侧 t 检验，若受试制剂均数在高方向没有大于等于参比制剂均数的 125％（P＜0.05），且在低方向也没有小于等于参比制剂均数的 80％（P＜0.05），即在两个方向的单侧 t 检验，都能以 95％的置信区间确认没有超出规定范围，则可认为受试制剂与参比制剂生物等效。 等效判断标准，一般规定，经对数转换后的受试制剂的 AUC0→t在参比制剂的 80％-125％范围， 受试制剂的 Cmax 在参比制剂的 70％-143％范围 。根据双单侧检验的统计量，同时求得（1－2α ）%置信区间，如在规定范围内，即可有 1－2α 的概率判断两药生物等效。 如有必要时，应对 Tmax 经非参数法检验，如无差异，可以认定受试制剂与参比制剂生物等效。 4. 群体生物等效性和个体生物等效性 目前均采用平均生物等效性（Average Bioequivalence ,ABE）评价方法，药物生物等效性的统计推断是以受试制剂和参比制剂生物利用度参数平均值为考察指标的,从他们的样本均数推断总体均数是否等效。由于平均生物等效性只考虑参数平均值,未考虑变异及分布,不能保证个体间生物利用度相近,对低变异和高变异药物设置的生物等效性标准一样。因此也有提出群体等效性（Population Bioequivalence, PBE）和个体生物等效性（Individual Bioequivalence,IBE）的概念。 PBE 评价的目的是为了获得某仿制药应用于人群的效果，不但要对被比较制剂均值的差别进行检验，还要比较被比较制剂的群体变异。IBE 评价除了比较均值的差别，还要比较个体内变异、个体和制剂间的交互作用，从而判断患者换用其它药物后是否合适。 因为目前对 PBE 和 IBE 评价方法经验有限，而且目前大多数药物运用ABE 评价方法可以满足要求，因此暂不对此提出要求。建议结合申报品种考虑，参照相关文献选择适宜的评价方法。
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