六、参考文献
1. ICH Steering Committee. Harmonised
Tripartite Guideline S 2. ICH Steering Committee. Harmonised Tripartite Guideline S2B：Genotoxicity:A
standard battery for genotoxicity testing of pharmaceuticals.1997 3. ICH Steering Committee. Harmonised
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staff: Recommended approaches to integration of genetic toxicology study
results. 2006 5. 致突变试验。见：新药（西药）临床前研究指导原则汇编（药学、药理学、毒理学）。中华人民共和国卫生部药政局，1993:211-216 6. 特殊毒性试验。见：中药新药研究指南（药学、药理学、毒理学）。中华人民共和国卫生部药政局，1994:216-221 7. 秦伯益主编. 新药评价概论，第二版. 人民卫生出版社.北京，1999：207-2318、 8. 袁伯俊、王治乔.新药临床前安全性评价与实践，第一版.军事医学科学院出版社.北京，1997 9. 遗传毒性试验。见：日本临床前研究指导原则解说。药事日报社，2002：25-34，167-190 10. Crutis D.Klaassen.
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Chemicals.471Bacterial reverse mutation test.1997 12. OECD Guideline for Testing of
Chemicals 13. OECD Guideline for Testing of
Chemicals.474 Mammalian erythrocyte micronucleus test.1997 14. OECD Guideline for Testing of
Chemicals 七、著者
《药物遗传毒性研究技术指导原则》课题研究组。 八、相关注释
注释1：TA1537、TA97和TA 注释2：有将A-T靶位点突变的菌株包含在测试组合中可检测出一些遗传毒性致癌剂的相关文献报道（如Levin等，1983；Wilcox等，1990）。日本劳务省对5525种化合物的数据库进行分析（以及由各个制药公司对较小的数据库进行分析）的结果表明，约7.5%的细菌诱变剂是由大肠杆菌WP2 uvrA而非4种鼠伤寒沙门氏菌株标准组合检出。尽管尚未获得这些化合物对动物致癌性的资料，但它们很可能具有与诱导鼠伤寒沙门氏菌株标准组合变化的诱变剂同样的潜在致癌性。 注释3：此处所指最高浓度的确定主要针对化学药物，因中药、天然药物所包含范围过宽（如有效成分类、有效部位类、中药复方类等），情况过于复杂，在合适时可参考化学药物的最高浓度的确定原则进行设计，不合适时需根据具体情况进行合理的设计。 注释4：出现这种情况可能是培养基中的血清或S9混合液成分增加了沉淀物的溶解性，也可能是细胞膜脂质层易化了细胞对脂溶性物质的吸收；此外，某些类型的哺乳类动物细胞具有内吞噬作用（如中国仓鼠V79、CHO和CHL细胞），能摄取固态颗粒，随后将其分散于胞浆中。某些不溶性化合物也可能含有可溶性的遗传毒性杂质。并且许多不溶性药物是以混悬液或颗粒状给予人体的。但是另一方面，沉淀物可能干扰结果的观察，并使得暴露的程度难以控制（如用离心方法从暴露介质中分离细胞时），或使受试物无法进入细胞与DNA发生作用。 已发现一些物质仅在产生沉淀的浓度范围内才显示出明确的遗传毒性，这些物质包括化合物的聚合物和混合物、某些多环苯烃、某些苯丙胺、七氯化合物等。有关其中一些物质的协作研究结果表明，它们的遗传毒性在可溶范围内可被检出，但在不溶性的范围内明显增高。 注释5：因微核形成机制与诱导染色体畸变有关，微核试验及染色体畸变试验均可用于筛选断裂剂。对相同受试物的小鼠微核试验与大鼠骨髓中期相分析的比较研究表明，在定性（即检测断裂剂的能力）和定量（即确定诱导断裂的最低剂量）这两方面均高度相关。采用同种动物进行试验时，可望得到更为一致的结果。 注释6：虽然微核的形成源于受试物与纺锤体相互作用导致整条染色体分裂的滞后，但微核试验无法检测所有非整倍体诱导剂。更特异的非整倍体畸变检测方法之一即是采用快速、灵敏的技术分析个体（啮齿类动物）分裂间期核中的染色体，如原位荧光分子杂交（FISH）方法。 注释7：鉴于微核和染色体畸变的诱导具有相关性，因而用雄性动物进行骨髓染色体畸变试验时，应用相同的实验条件是合理的。外周血微核试验和体内前处理的UDS试验一样仅在雄性啮齿类动物中得到验证。 注释8：目前被接受的评价哺乳动物细胞基因突变的试验方法包括小鼠淋巴瘤L5178Y细胞或人淋巴母细胞TK6细胞tk试验，CHO细胞、V79细胞或L5178Y细胞hprt试验，AS52细胞gpt试验。 注释9：对在tk位点诱导的突变体分子分析显示存在多种遗传学变化，包括点突变、缺失、移位、重组等。对小集落突变体分析显示tkb等位基因的缺失是染色体结构或数目的改变或重组的结果。有证据表明其他位点，如hprt或gpt也对染色体的大范围缺失敏感，但由于来源于X染色体的的hprt基因很可能位于生命必需基因（Essential genes）的侧面，染色体的大范围缺失或数目改变往往不引起突变集落，因此对于检测多种遗传学改变，该遗传位点的灵敏度不如tk位点。 注释10：有少数明显的遗传毒性致癌剂确能被骨髓染色体损伤试验检出，但在标准组合选择的几对体外试验中，如细菌回复突变试验和一项可选择的染色体损伤细胞遗传学评价试验组合，或细菌突变试验和小鼠淋巴瘤tk试验组合，却得到阴性、弱阳性或相互矛盾的结果。丙卡巴肼、氢醌、氨基甲酸乙酯、苯等致癌剂即属于此类。 注释11：某些具有遗传毒性可疑结构的分子单体与化合物的致癌和/或致突变有关。可疑结构包括烷化亲电子中心、不稳定过氧化物、芳香胺、偶氮结构、N-亚硝基基团、芳香硝基基团。 注释12：靶组织：此处特指体内试验的检测目标组织，如小鼠骨髓微核试验中的骨髓。 注释13：已有文献报道关于体内和体外试验结果之间差异的问题，差异包括：（a）体外形成的代谢产物未必在体内形成；（b）活性代谢产物可能在体内迅速被解毒而体外则不能；（c）受试物在体内可迅速、有效地被排泄等。 注释14：虽骨髓或外周血以外组织进行的体内试验可提供有用的信息，但是至今仍无一种已经验证并广泛应用的检测基因突变的体内试验方法。一些用大鼠或小鼠某些组织中的内源性基因或转基因的体内基因突变方法还处于研究阶段。在这类方法得到公认之前，采用骨髓以外的组织检测遗传毒性的体内试验方法可进一步提供一些有价值的数据，但应对选用该方法的合理性进行科学验证。如对于体内肝程序外DNA合成（UDS）试验，对文献的回顾表明，将肝UDS试验和骨髓微核试验二种方法组合，可检测出大多数遗传毒性致癌剂，且假阳性率较低。但是，某些不稳定的遗传毒性化合物和某些芳香胺，用该组合试验检测虽然也得到阴性结果，但是，在很多体内试验方法却证明这些化合物是有问题的，因此，进一步的体内试验结果不应仅局限于肝UDS试验，其他方法如32P后标记、DNA链断裂试验等也应予以考虑。 |
