（四）、线性 应在分析方法的范围内评价检测结果与供试品中被分析物浓度（或含量）的线性关系。 可用所建议的方法，直接对标准品、供试品进行测定。应以信号对被分析物的浓度作图，根据图形是否呈线性进行评价。如果有线性关系，可用适当的统计方法估算试验结果。在某些情况下为使分析指标和供试品浓度呈线性关系，可在回归分析前对测试数据进行数学转换。应提供相关系数、Y 轴上的截距、回归线的斜率等数据，还可以分析实测值与回归线的偏差（离散性），以助于对线性作出评价。 对于某些生物学测定方法，在任何转换后均不能证明呈线性，或呈线性关系的范围较小，在这种情况下，分析的响应值可用供试品中被分析物的浓度（含量）的适当函数表示。可以采用曲线拟合方法，通过测定全范围曲线，在标准品或参考品的矫正下，依 ED50 或 IC50值计算活性单位。应提供拟合曲线方程及各参数，并提供相关系数。 （五）、范围 具体的范围一般根据检测的目的而设定，并通常从线性研究中得到。 验证时所设定的范围应至少包括了检定标准中规定的范围，如标准中规定成品生物活性应为标示量的 80％～120％，则验证的范围可设定为标示量的 70～130％。 确定范围的方法为：供试品浓度（含量）在范围末端和范围内时，均能获得满意的线性、精密度和准确性。 对于生物制品的生物活性测定而言，精密度、线性和范围是非常重要的验证参数。为减少验证工作的繁杂性，可将范围研究与精密度、线性研究合并进行（参见推荐的验证设计方案）。 （六）、耐用性 在研制阶段即应进行耐用性的评估，它应能表明在方法的参数有微小改变时该分析方法仍然是可靠的。 参数的改变可以是对温度、湿度、培养时间、试剂的 pH 等进行适当的调整，根据具体情况，可针对一个或几个关键的参数进行验证。 在每种试验条件下，均需对准确性、精密度或其它参数进行测定。生物学测定结果对分析条件往往比较敏感，耐用性研究的结果将建立一系列系统适用性参数，以确保在每一次实际测定中该方法都是有效的。 （七）、检测限度 检测限度的测定可以通过直观法、信噪比法等测定。 直观法：对一系列已知浓度分析物的供试品进行分析，并以能测得被分析物的最小量来建立。 信噪比法：将已知低浓度试样测出的信号与空白样品测出的信号进行比较，算出能被可靠地检测出的最低量。一般可接受的信噪比为 3：1 或 2：1。 （八）、定量限度 定量限度的测定也可以通过直观法、信噪比法等测定。 直观法：对一系列已知浓度被分析物的供试品进行分析，在准确性和精密度都符合要求的情况下，来确定被分析物能被定量的最小量。 信噪比法：将已知低浓度试样测出的信号与空白样品测出的信号进行比较，算出能被可靠地检测出的最低量。一般可接受的信噪比为 10：1。 六、综合分析 根据方法的来源、测试原理、方法的技术特点以及具体的验证结果等，对于质控分析方法的准确性和可靠性进行综合分析，并评价由拟定的质控分析方法构成的制检规程能否基本控制产品质量。 七、名词解释 准确性（Accuracy）：分析方法的准确性是指测定值与真实值或认可的参考值的一致性或接近程度。 精密度（Precision）：分析方法的精密度是指在规定条件下对均质供试品多次取样进行一系列检测结果的接近程度，一般表示为变异系数（CV％），变异系数即是测定值的标准差和测定值均数的比值。精密度可以从三个层面考虑，即重复性、中间精密度、重现性。 重复性（Repeatability）：是指在同样的操作条件下，在较短时间间隔的精密度。 中间精密度（Intermediate precision）：是指在试验室内部条件改变，如不同日期、不同分析者、不同仪器、不同批号或来源的实验材料等情况下的精密度。 重现性（Reproducibility）：是指不同实验室间的精密度，需通过多个实验室之间的协作研究得到。当分析方法将被法定标准采用时，应进行重现性试验。 线性（Linearity）：分析方法的线性是指在给定的范围内检测结果与供试品中被分析物的成比例关系。 范围（Range）：分析方法的范围是能达到一定的准确性、精密度和线性时被分析物的较高和较低浓度（量）的一个区间。 专属性（Specificity）：分析方法的专属性是指当制品中含有其它组分，如杂质、降解物、添加物（如缓冲液、赋形剂、稳定剂）等存在时，准确可靠测定供试品的能力。 耐用性（Robustness）：分析方法的耐用性是指试验参数被有意进行微小改变时，测量结果不受影响的能力，用于说明通常使用条件下该分析方法的可靠性。 检测限度（Detection limit）：分析方法的检测限度是指供试品中的被分析物能够被检测到的最低量，但不一定要准确定量。 定量限度（Quantitation limit）：分析方法的定量限度是指准确性和精密度都能达到要求时能够定量测定供试品中被分析物的最低量。 八、参考文献 1、 ICH. Q2a Test on Validation of Analytical
Procedures 2、 ICH. Q2b Validation of Analytical
Procedures ：Methodology 3、 FDA. Analytical Procedures and Methods
Validation Chemistry, Manufacturing, and Controls Documentation 4、 WHO. WHO Guide to Good Manufacturing
Practice Requirements，Part2：Validition 5、 Heath AB.Statistical Validity of
Bioassays.Dev Biol Stand，1999，97：151～156 6、 Lansky D.Validition of Bioassays for
Quality Control. Dev Biol Stand，1999，97：157～168 7、 中国生物制品标准化委员会办公室.2000. 国外生物制品管理和标准（续Ⅲ） 8、 王军志.生物技术药物研究开发和质量控制.北京：科学出版社，2002 年.第 128 页～第 136 页 九、附录：推荐的验证设计方案 以下为部分参数的验证设计方案，供研究者参考： （一）、精密度 1、 重复性 目的：确定在同一个试验内同一个供试品在测量范围内的不同浓度时测定的精密度。 步骤：配制 3 个稀释度的供试品（测量范围内的高、中、低浓度）每一个稀释度重复测定 10 次 计算每一浓度测定结果的均值和 SD 计算每一浓度的 CV 值 2、 中间精密度 目的：确定在不同试验间对测量范围内同一个供试品在不同浓度时测定的精密性。 步骤：配制 3 个稀释度的供试品（测量范围内的高、中、低浓度）在 3 个试验中对每一个稀释度重复测定 3 次测定不同工作日间的变化测定不同批号的试验材料间的变化测定不同实验员间的变化等等 计算每一试验中每一浓度测定结果的均值和 SD 计算试验间每一浓度的 CV 值 （二）、线性和范围 目的：测定观测值响应关系的拟合度步骤：在测量范围内配制 6-8 个稀释度每一稀释度测定 3 次，每次重复测定 3 份进行回归分析并计算试验的相关系数 r |
