注意：（1）每个实验室都需要测定3个不同厂家的同一种培养基，如果某种培养基只有2个厂家生产，则需其中一家选用至少2个批号并注明。（2）除试验的新抗菌药物外，还需同时选择同类中相似品种作为对照药。如没有同类药物，则选择具有相似抗菌谱的药物作对照。对照药只需使用1个批号的培养基和纸片，其他同试验药。对照药的结果必须在质控范围内，如果对照药失控，当天的其他数据也需要重复。（3）每次接种需使用独立制备的接种液，MIC值低于0.002mg/L的数据应舍去，并且避免出现低于敏感折点5个稀释度的MIC值。 结果分析：统计平均值、标准差、范围及中位数。95%的数据应该落在建议的范围内，对于稀释法，此范围应包含众数±数的稀释度。理想的质控范围包括3个稀释度，但有时可以为4个稀释度（表3）。 表3 质控范围的选择
九、研究中的注意事项
1. 新抗菌药物申请上市时，需要提出至少是MIC和纸片法的敏感折点及标准菌株质控范围。 2. 折点研究的特点：一是贯穿抗菌药物新药研发整个过程，二是其分析数据均来源与药物的药效、药代、临床研究。因此研发单位应尽早了解折点研究相关内容与要求，于各项试验设计阶段即予以全面考虑，随着药物研发的推进，各阶段的界值、折点也相应得到。而不要等到申请上市时，再从头补充试验。 3. 即便经过临床试验阶段的验证，折点的最终确立还远未完成。临床折点考察的是推荐给药途径和剂量下药物与病原菌的关系，且和感染部位、患者机体应答等相关。临床试验阶段，给药方案较单一，对进入研究的患者有严格要求，不利于从适合的结果中发现异常，且对于临时折点偏低的问题也不易发现。因此，即便药物上市后，对折点的验证仍需持续进行。 4. 折点是对抗菌药物活性的人为划分，制定过程中需权衡其精准性与便捷性。理论上，针对不同菌属/种以及不同给药方案，有可能得到不同的折点。实际运用中，可适当合并获得合理数量的折点。 5. 目前CLSI关于野生型细菌的定义为：最低抑菌浓度不高于流行病学界值的细菌群体，推测该群体没有获得性耐药及突变耐药。理论上，用于研究的野生型细菌最好是遗传背景清楚，没有获得性耐药及突变耐药的菌株。但实际应用中，当这样的菌株数量欠缺时，也可以通过表型来选取野生型细菌。其定义即表明此操作的可行性。 6. 复方制剂需针对特定的比例或固定某一成分时给出相应折点。
十、名词解释
1. 最低抑菌浓度（Minimal Inhibitory Concentration, MIC）：体外抗菌药物敏感性试验中，抑制培养基内病原菌生长所需的最低药物浓度。 2. 杀菌曲线（Time-kill Curves）：反映抗菌药物对细菌杀灭程度随时间变化的曲线。常指静态杀菌曲线，即固定一系列抗菌药物浓度，观察细菌与抗菌药物混合后在不同时间点的菌落数。以时间为横坐标，logCFU/ml为纵坐标绘制杀菌曲线。根据曲线还可以计算杀菌速率，分析杀菌速率随浓度的变化。 3. 抗生素后效应（Post-antibiotic Effects PAE）：细菌暴露于抗菌药物后，在去除抗菌药物的情况下恢复生长，处于对数生长期时菌落数增加1个log值所需要的时间与对照菌相应时间之差。≥0.5小时，即该抗菌药物具有PAE。 4. 药物代谢动力学（Pharmacokinetics，PK，简称药代动力学）：定量描述药物在机体内吸收（absorption）、分布（distribution）、代谢（metabolism）和排泄（excretion）的过程及药物浓度随时间动态变化的规律，可概括为ADME过程。反映ADME过程的主要PK参数包括：血药高峰浓度（Cmax）、达峰时间（Tmax）、药时曲线下面积（AUC）、表观分布容积（V）、药物清除率（CL）和末端相消除半衰期（T1/2）等。 5. 药效学（Pharmacodynamics，PD）：指药物效应的大小随时间的变化过程。对抗菌药物而言，是指药物在体外或体内抑制病原菌生长和复制（抑菌）或致病原菌细胞死亡（杀菌）的作用。主要药效学参数包括抗菌药物对细菌的最低抑菌浓度（MIC）、最低杀菌浓度（MBC）、抗生素后效应（PAE）、亚抑菌浓度下的抗生素后效应（postantibiotic sub/MIC
effect，PA/SME）和防突变浓度（mutation
prevention concentration，MPC）等。 6. 群体药物代谢动力学（Population Pharmacokinetics，PPK）：指将经典的药代动力学模型与群体统计学模型（population statistical model）结合，研究药代动力学特性中存在的变异性，研究药物体内过程的群体规律、药代动力学参数的统计分布及其影响因素。 7. 蒙特卡洛模拟（Monte Carlo Simulation，MCS）：考察PK/PD指数在大量人群中分布规律的统计试验方法。首先根据PK参数和PD参数的分布特征进行随机抽样，然后将随机数值代入公式计算PK/PD指数，获知其分布规律，最终得到PK/PD指数达到靶值的概率。 8. 野生型细菌（Wild-type Bacterial Strains）：最低抑菌浓度不高于流行病学界值的细菌群体，推测该群体没有获得性耐药及突变耐药。 9. 流行病学界值（Epidemiological Cutoff）：也可称作野生型界值（Wild-type Cutoff，COWT）或微生物学折点（Microbiological Breakpoint），通过表型（MIC）测定，区分存在和不存在获得性耐药/突变耐药机制的菌群最低抑菌浓度，通常为野生菌群最低抑菌浓度的上限。流行病学界值只基于体外研究数据获得。 10. PK/PD界值（PK/PD cutoff, COPD）：即药代动力学（PK）和药效学（PD）界值，根据与临床疗效最为相关的PK/PD指数及靶值，模拟获得某给药方案下，达标概率为90%时的MIC。 11. 折点（breakpoint）：也可称作临床折点（clinical breakpoint,
CBPs），根据抗菌药物抑制细菌生长所需要的MIC，结合常用剂量时人体内所达到的血药浓度，划分细菌对各种抗菌药物敏感、中介或剂量依赖敏感、耐药的界限。 12. 敏感（Susceptible, S）：对感染部位使用推荐剂量时，该菌株能被通常可达到的抗菌药物浓度所抑制。
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