4.2试剂配制 4.2.1乙醇溶液(78%):取821 mL 95%乙醇,用水稀释并定容至1 L, 混匀。 4.2.2乙醇溶液(85%):取895 mL 95%乙醇,用水稀释并定容至1 L, 混匀。 4.2.3 盐酸溶液(1 mol/L):量取83 mL浓盐酸,缓慢加人500 mL水中,混合均匀后加水稀释至1 L。 4.2.4 盐酸溶液(2 mol/L):量取167 mL浓盐酸,缓慢加入500 mL水中,混合均匀后加水稀释至1 L。 4.2.5氢 氧化钠溶液(4 mol/L):称取16 g氢氧化钠,缓慢加人60 mL水，溶解后加水稀释至100 mL,混匀。 4.2.6氢氧化钠溶液(1 mol/L):称取4 g氢氧化钠,缓慢加入60 mL水,溶解后加水稀释至100 mL,混匀。 4.2.7氢氧化钠溶液(0.1 mol/L): 称取0.4 g氢氧化钠,缓慢加入60 mL水，溶解后加水稀释至100 mL,混匀。 4.2.8顺丁烯二酸缓冲液(50 mmol/L):称取11.6 g顺丁烯二酸溶于1600 mL水中,用4 mol/L氢氧化钠溶液调整至pH=6.0,再加入0.6 g二水合氯化钙，加水稀释至2 L。在4 C避光保存，保存期不超过1个月。 4.2.9三羟甲基氨基甲烷( Tris)溶液(0.75 mol/L):称取90.8 g Tris固体溶于约800 mL水中,加水稀释至1L。 4.2.10乙酸溶液(2 mol/L):量取115 mL冰乙酸,加水稀释至1 L。 4.2.11混合酶溶液:取0.5 g胰a淀粉酶与0.05 g淀粉葡萄糖苷酶,用50 mL 50 mmol/L顺丁烯二酸缓冲液配成每毫升含400 U胰a-淀粉酶和30 U淀粉葡萄糖苷酶的溶液,涡旋振荡5 min。临用现配。 注:如需降低淀粉酶解时间,可配制高浓度混合酶溶液，即胰a-淀粉酶和淀粉葡萄糖苷酶浓度分别为800U/mL和340 U/mL。 4.2.12蛋白酶溶液:取2.5 g蛋白酶,用50 mI 50 mmol/L顺丁烯二酸缓冲液配成每毫升含50 mg的蛋白酶溶液,涡旋振荡5 min。临用现配。使用前于4 °C储存。 4.2.13酸洗硅藻土:取200 g硅藻土于600 mI的2 mol/L盐酸中,浸泡过夜,过滤,用水洗至滤液为中性,置于550 °C士5 °C马弗炉中灼烧后备用。 4.2.14重铬酸钾洗液 :称取100 g重铬酸钾,用200 mI水溶解，把烧杯放于冷水中冷却后,缓慢加人1800mL浓硫酸混合,边加边用玻璃棒搅动,防止溅出。 4.3标准品 4.3.1二甘醇(C4H10O3):CAS号111-46-6
,纯度≥99%。 4.3.2 D-葡萄糖(C6H12O6):CAS号50-99-7,纯度≥99%。 4.3.3蔗果三糖(C18H32O16):CAS
号470-69-9,纯度≥98%。 4.3.4 D-麦芽糖一水合物(C12H22O11·H2O)
:CAS号69-79-4,纯度≥98%。 4.4标准溶液配制 4.4.1 二甘醇内标溶液(100 mg/mL):准确称取10 g(精确至0.1 mg)二甘醇,用水稀释，转移至100 mL容量瓶中，加水定容至刻度。临用现配。 4.4.2 D-葡萄糖标准溶液(10 mg/mL):准确称取1.0 g (精确至0.1 mg)D-葡萄糖,用水溶解后转移至100mL容量瓶中,加水定容至刻度。临用现配。 4.4.3 D-葡萄糖/二甘醇溶液标准系列工作液:分别吸取0.50 mL、1.0 mL、2.0 mL、4.0 mL和8.0 mL、10mg/mLD葡萄糖标准溶液至10mL容量瓶中,再加人0.2mL100mg/mL二甘醇内标溶液,加水稀释并定容至刻度。标准系列工作液中D-葡萄糖含量分别相当于0.5 mg/mL、1.0 mg/mL、2.0 mg/ mL、4.0 mg/mL和8.0 mg/mL,二甘醇含量相当于2.0 mg/mL。临用现配。 4.4.4定性用标准溶液：称取约0.10 g蔗果三糖和0.10 gD-麦芽糖一水合物,用水溶解,转移至50 mL 容量瓶中,加人1mL 100 mg/mL二甘醇内标溶液,加水定容至刻度。临用现配。 5仪器和设备 5.1 分析天平:感量0.1 mg和1 mg。 5.2膳食纤维测定装置 5.2.1真空过滤装置:真空泵或有调节装置的抽吸器。1L抽滤瓶,侧壁有抽滤口,带与抽滤瓶配套的橡胶塞,用于酶解液抽滤。 5.2.2 恒温振荡水浴箱:带自动计时器,控温范围在室温十5 ℃~ 100 ℃ ,温度波动士1 ℃。 5.2.3高型 无导流口烧杯:400 mL或600 mL。 5.2.4 坩埚:具粗面烧结玻璃板,孔径40 μm~60 μm。清洗后的坩埚在马弗炉中550 ℃士25 ℃灰化6h，炉温降至130℃以下取出，于重铬酸钾洗液中室温浸泡2h,分别用自来水和水冲洗干净,最后用15 mI丙酮冲洗后风干。用前,加入约1.0 g硅藻土,130℃士3 ℃烘至恒重;取出坩埚,在干燥器中冷却约1 h,称量记录坩埚质量(含硅藻土,mG),精确至0.1 mg。 5.3 高效液相色谱仪(HPLC):配置示差折光检测器和80℃柱温箱。 5.4 烘箱:40℃士1℃,105℃士2℃ ,130℃士3℃。 5.5 马弗炉:550℃士25℃。 5.6 旋转蒸发仪。 5.7 干燥器:二氧化硅或同等的干燥剂。 5.8 pH计:具有温度补偿功能,精度士0.1。 用前用pH 4.0、7.0和10.0标准缓冲液校正。 5.9 水相微孔滤膜:孔径0.45 um。 5.10匀浆机或粉碎机。 6分析步骤 6.1 试样制备 所有试样均需匀质处理。必要时可根据水分、脂肪和糖的含量进行脱水、脱脂或脱糖处理。 6.1.1匀质处理 固体试样经碾磨、粉碎、混匀后备用,半固体、液体试样经匀浆混匀后备用。 6.1.2脱水 水分含量≥70%且不易混匀的固体、半固体及含有沉浮物的液体试样,称取适量试样(mc,不少于50 g),置于105 ℃士2 ℃烘箱干燥4 h。将试样转至干燥器中,待试样温度下降到室温后称量(mp)。根据干燥前后试样质量,计算试样质量变化因子(f)。干燥后试样匀质化处理后,置于干燥器中待用。 注:也可参照GB5009.3采用减压干燥的方法。 6.1.3 脱脂 脂肪含量≥10%的试样,称取适量试样(mc,不少于50 g),置于1 000 mL锥形瓶中,加入500 mI石油醚混匀、放气，振摇2 min,放置10 min后,去除石油醚,连续3次。脱脂后试样混匀再按6.1.2进行干燥，称量(mD,计算处理后试样质量变化因子(f)。试样匀质化处理后,置于干燥器中待用。 注:若试样脂肪含量未知,可按先脱脂再干燥粉碎的方法处理。 6.1.4 脱糖 称适量试样(mc,不少于50 g), 置于1 000 mL锥形瓶中,加入500 mL 85%乙醇溶液,混匀,振摇2 min,去除乙醇溶液部分,连续3次。脱糖后试样置于40 ℃烘箱内干燥过夜,称量(mD),计算处理后试样质量变化因子(f)。试样匀质化处理后,置于干燥器中待用。 注:一般情况下试样无需脱糖处理,如试样因糖含量较高导致黏度过大,影响后续酶解、抽滤效果,宜采用脱糖处理;需要测定SPFS的试样不宜进行脱糖处理。 6.2称样 准确称取2份待测试样(m),精确至0.1 mg,2份试样质量差≤0.005 g。一般固体试样称取0.25 g~3 g,液体试样称取1.0 g~5.0 g。 6.3酶解 将试样转置于400 mL~600 mL高脚烧杯中,加入50 mmol/L顺丁烯二酸缓冲液35 mL,用磁力搅拌直至试样完全分散在缓冲液中。同时制备2个空白样品同步操作。 注:搅拌均匀,避免试样结成团块,以防止酶解过程中试样不能与酶充分接触。
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