4测试菌株的保藏及使用 4.1 一般要求 为成功保藏及使用菌株,不同菌株应采用不同的保藏方法,可选择使用冻干保藏、超低温(不高于-70℃)冷冻保藏、液氮保藏或其他有效的保藏方法。 4.2商业来源的测试菌株 对于从标准菌种保藏中心或其他有效认证的商业机构获得的原包装测试菌株,复苏和使用应按照制造商提供的使用说明进行。 4.3实验室制备的标准储备菌株 用于性能测试的标准储备菌株(见附录C中图C.1),在保存和使用时应注意避免交叉污染,减少菌株突变或发生典型的特性变化;标准储备菌株应制备多份,并采用超低温(不高于-70℃)或冻干的形式保存。在较高温度下贮存时间应缩短。 标准储备菌株用作培养基的测试菌株时应在文件中充分描述其生长特性。 标准储备菌株不能用于制备标准菌株。 4.4储备菌株 储备菌株通常用冻干或超低温保存的标准储备菌株进行制备(见图C.2)。 制备储备菌株应避免标准储备菌株的交叉污染和(或)退化。制备储备菌株时,应将标准储备菌株制成菌悬液转接至非选择培养基中培养，以获得特性稳定的菌株。 对于商业来源的菌株,应严格按照制造商的说明执行。 储备菌株不能用于制备标准储备菌株或标准菌株。 4.5工作菌株 工作菌株由标准储备菌株或储备菌株制备。 工作菌株不能用于制作标准菌株、标准储备菌株或储备菌株。 5培养基和试剂的质量要求 5.1 基本要求 5.1.1培养基和试剂 培养基和试剂的质量由基础成分的质量、制备过程的控制、微生物污染的消除及包装和贮存条件等因素所决定。 供应商或制备者应对基础成分的质量、制备过程、微生物污染的消除及包装和贮存条件进行控制，确保培养基和试剂的理化特性满足相关标准的要求。 培养基和试剂的各种成分、添加剂或选择剂应进行适当的质量评价。 附录F中未描述的培养基和试剂,应根据以下规定进行质量控制: ——不含指示剂或选择剂的培养基,可根据培养基的使用范围选择菌株进行测试; ——含有指示剂和选择剂的培养基,应使用能证明指示剂和选择性功能的菌株进行测试; ——使用前需添加添加剂的培养基和鉴定试剂,应使用特征性的菌株进行测试。 5.1.2 基础成分 国家标准中列出的培养基成分通常可以直接使用。因用于制备培养基的部分成分(见附录D)质量差异,可允许对其用量进行适当的调整,如: ——根据营养需要改变胨类、浸粉类的用量; ——根据所需凝胶作用的效果改变琼脂的用量; ——根据缓冲要求决定缓冲物质用量; ——根据选择性要求决定胆盐、胆汁抽提物和脱氧胆酸盐、抗菌染料的用量; ——根据抗生素的效价决定其用量。 5.2微生物学要求 5.2.1概论 培养基和试剂应达到附录F质量控制标准的要求,其性能测试方法按第6章执行。实验室使用商品化培养基和试剂时,应保留生产商按3.1.1 提供的资料,并制定验收程序。如果生产商能提供具备相应检验能力,并取得国家相关认证认可资质检验机构出具的同批次产品检验报告,实验室可保留相关证明文件,根据实际需求对该批次培养基的性能进行重复测试(附录F中未包含的培养基和试剂,可根据培养基和试剂的性能,参考附录F建立方法进行检验)。 5.2.2 生长特性 5.2.2.1 一般要求 选择下列方法对每批成品培养基或试剂进行评价: ——定量方法; ——半定量方法; ——定性方法。 采用定量方法时,应使用参比培养基(见附录E)作为对照;采用半定量和定性方法时,使用能得到“阳性”结果的培养基作为对照有助于结果的解释。 5.2.2.2生长率 按规定用适当方法将适量测试菌株的工作菌悬液接种至固体、半固体和液体培养基中。 每种培养基上菌株的生长率应达到所规定的最低限值(见附录F)。 5.2.2.3选择性 为定量评估培养基的选择性，应按照规定以适当方法将适量测试菌株的工作培养物接种至选择性培养基和参比培养基中,培养基的选择性应达到规定值(见附录F)。 5.2.2.4生理生化特性(特异性) 确定培养基的菌落形态特征、鉴别特性,或试剂的鉴别特性,以获得培养基或试剂的基本特性(见附录F)。 5.2.2.5性 能评价和结果解释 若使用规定的所有测试菌株,培养基或试剂的性能测试达到标准要求，则该批培养基或试剂的性能测试结果符合规定。若基本要求和微生物学要求均符合规定,则该批培养基或试剂可被接受。 6培养基和试剂性能测试方法 6.1非选择性分离和计数固体培养基目标菌生长率定量测试方法 6.1.1工作菌悬液的制备 将标准储备菌株、储备菌株或工作菌株接种到非选择性肉汤培养过夜或采用其他方法,制备10倍系列稀释的菌悬液。进行生长率测试时,细菌和酵母菌每平板的接种水平为50 CFU~250 CFU,霉菌每平板的接种水平为30 CFU~150 CFU。 6.1.2接种 选择适宜稀释度的工作菌悬液0.1 mL,均匀涂布接种于待测平板和参比平板。每一稀释度接种两个平板。也可使用螺旋涂布法或倾注法进行接种,并按标准规定的条件培养。 6.1.3计算 参考GB4789.2的要求,选择菌落数适中的平板进行计数,生长率按式(1)计算。 …………………………………………………….. 注：由于公式与图表太多不易上传，后面部分欲读者请“食品安全国家标准数据检索平台”下载：https://sppt.cfsa.net.cn:8086/db?type=2&guid=3B34B8D6-7164-4419-B308-6AF683E8B606 |
