前言 本标准为推荐性标准。 本标准代替WS/T 63-1996《尿中亚硫基二乙酸的气相色谱测定方法》，与WS/T 63-1996相比，主要技术变化如下: ——删除了尿中亚硫基二乙酸的气相色谱法(见1996年版) ; ——增加了 尿中亚硫基:二乙酸离子色谱法(见第4章)。 本标准由国家卫生健康标准委员会职业健康标准专业委员会负责技术审查和技术咨询,由中国疾病预防控制中心负责协调性和格式审查，由国家卫生健康委职业健康司负责业务管理、法规司负责统筹管理。 本标准起草单位：北京市化工职业病防治院(北京市职业病防治研究院)、中国疾病预防控制中心职业卫生与中毒控制所、国家卫生健康委职业安全卫生研究中心、深圳市职业病防治院。 本标准主要起草人：潘兴富、刘晓东、牛东升、丁晓文、郭启芬、赵玮、崔师伟、郑玉桥、李添娣、负建培。 本标准及其所代替标准的历次版本发布情况为: ——1996年首次发布为WS/T 63-1996; ——本次为第一次修订。
尿中亚硫基二乙酸测定标准 离子色谱法 1范围 本标准规定了尿中亚硫基二乙酸的离子色谱测定法。 本标准适用于职业接触氯乙烯人员尿中亚硫基二乙酸浓度的测定。 2规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本标准必不可少的条款。其中,注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本标准;不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本标准。 GBZT 210.5职业卫生标准制定指南第5部分:生物材料中化学物质测定方法 GBZ/T 224职业卫生名词术语 GBZ/T 295职业人群生物监测方法总则 3术语和定义 GBZ/T 224及GBZ/T 295界定的术语和定义适用于本标准。 4原理 尿样用固相萃取小柱净化，经阴离子交换色谱柱分离，电导检测器检测，以保留时间定性,测定峰面积或峰高，采用外标标准曲线法定量。 5仪器 5.1纯水机。 5.2 离心机。 5.3涡旋振荡器。 5.4 尼龙滤膜过滤头:
0.22um。 5.5 电子天平:感量0.01mg。 5.6尿比重折射仪。 5.7固相萃取小柱ODS-C18
(200 mg, 3 mL)，或等效萃取柱。 5.8 离心管: 50 mL、15 mL. 5.9离子色谱仪:配备电导检测器和阴离子抑制器。 仪器操作参考条件: a)色谱柱: IonPac AS19阴离子交换色谱柱(250 mmx4 mm)，或其他等效离子交换色谱柱; b)淋洗液:氢氧化钾溶液; c)梯度淋洗模式:0 min-10
min,20.0 mmolL;10 min-20 min, 20. 0 mmol/L-30. 0 mmolL;20 min-30 min，30. 0 mmol/L-60.0 mmol/L; 30 min-36 min，60.
0 mmol/L。 d) 淋洗液流速: 1. 0
mL/min; e) 抑制器:抑制电流150 mA; f) 进样体积: 25 uL。 6试剂 6.1 亚硫基二乙酸:纯度≥99.5%。 6.2 甲醇:色谱纯。 6.3 去离子水:电阻率≥18.2 MΩ•cm。 6.4亚硫基 二乙酸标准溶液:准确称取亚硫基二乙酸标准品50.0 mg于50 mL容量瓶中，用去离子水定容至刻度，所得浓度为1000 μg/mL 的标准贮备液，于冰箱4℃冷藏，可保存7 d。临用时用去离子水稀释成浓度为100. 0 μg/mL的标准应用液。 7样品的采集、运输和保存 7.1按照GBZT295的要求进行尿样采集和运输。 7.2 样品采集:采集氯乙烯接触者班后2h-10h的尿，或下一个班前尿，采样时防止污染。尿样的采集应大于20 mL。必要时采集双份样品，一份作为备份样品。 7.3 样品空白:在样品采集的过程中，同时制备3份样品空白。模拟采集去离子水，并与样品同时运输和储存。 7.4 样品采集后，2h内用尿比重折射仪测尿样比重。 7.5样品运输:将采集后的样品和样品空白置于清洁容器中4℃冷链运输。 7.6样品保存: 样品在4℃下可保存5d；样品在-20℃下可保存14d. 8分析步骤 8.1标准 系列的配制和测定 用标准应用液和去离子水配制成浓度分别为0.00 μg/mL、0. 05 ug/mL、0. 10 μg/mL、 0. 50 μg/mL、2.50 μ/mL、10. 00 μg/mL、 50. 00 μg/mL 的标准系列溶液。按照仪器操作参考条件，将离子色谱仪调节至最佳测定状态，取25uL进样，测定标准系列，以保留时间定性，峰面积或峰高值对亚硫基二乙酸浓度(μg/mL) 计算线性回归方程。 8.2活化小柱在固相萃取小柱中依次加入2
mL甲醇和2 mL去离子水，自然淋洗以活化固相萃取小柱，并用吸耳球吹掉柱内残液。 8.3 样品处理 尿样放至室温，取10 mL加入15 mL离心管中，3000 r/min常温离心10 min;取上层尿样2.5mL于10mL容量瓶中，用去离子水定容至刻度，涡旋振荡1min;准确量取2.0mL稀释后的尿样通过活化后的固相萃取小柱,用1.0 mL去离子水淋洗小柱并用吸耳球吹出柱内残液,收集全部流出液，涡旋振荡1min;用0.22um尼龙滤膜过滤头过滤后转移到进样小瓶待测。或使用自动固相萃取装置处理。 8.4样品测定 用测定标准系列的仪器操作条件测定处理后的样品及样品空白溶液的峰面积或峰高,方程得亚硫基二乙酸的浓度(μg/mL) 。当样品空白检验结果大于方法检出限时，应对方法空白、采样容器空白容器空白试剂空白和仪器空白等进行检验，以确定样品空自结果的来源。样品浓度超过测定范围，可用去离子水稀释后测定，计算时乘以稀释倍数。 8.5 质量控制 检测过程质量控制应按照GBZ/T 295的要求进行。 9计算 9.1 按式(1) 计算尿样中亚硫基二乙酸的浓度: ρ=ρo×6×k……………………(1) 式中: ρ——尿样中亚硫基_二乙酸质量浓度，单位为微克每毫升(μg/mL); ρo——由回归方程计算的亚硫基二乙酸质量浓度，单位为微克每毫升( ug/mL); 6——稀释系数; K——尿样换算成标准比重(1.
020) 下的浓度校正系数。 9.2 按照GBZ/T 295中的方法测定尿比重，对检测结果进行比重较正。 10 说明 10. 1本标准 按照GBZ/T
210. 5的方法和要求进行研制。 10.2本方法检 出限为0.1
ug/mL, 定量下限为0.3 μg/mL; 方法测定范围为0.3μg/mL-300. 0 ug/mL;批内精密度范围为0.7%-5.0%;批间精密度范围为0. 5%-8.8%;加标回收率为80. 1%-104.2%。 10.3 尿样应在冷冻前测定比重，剔除尿比重低于1.010 g/mL和大于1. 030g/mL的尿样。 10.4 经实验，氟离子(F-)、氯乙酸根离子(C2H2ClO2-)、氯离子(Cl-)、二氯乙酸根离子(C2HC1202-)、亚硝酸根离子(NO2-) 、硝酸根离子(NO3-) 、碳酸根离子(CO32-) 、硫酸根离子(SO42-)
+三氯乙酸根离子(C2Cl3O2-)、磷酸根离子(PO43-) 等均不存在干扰。 10.5 色谱分离图见图1. 图1色谱分离图
注: 1一一氟离子(F-); 2一一氯乙酸根离子 (C2H2ClO2-) ; 3一一氯离子(C1-) ; 4一一二氯乙酸根离子(C2HC1202-) ; 5一一亚硝酸根离子(NO2-) ; 6一一硝酸根离子(NO3-) ; 7一一碳酸根离子(CO32-) ; 8一一硫酸根离子(SO42-) +三氯乙酸根离子(C2Cl3O2-)
; 9一一亚硫基二乙酸根离子(TDGA) ; 10一一磷酸根离子(PO43-)。 |
