第二节　中成药鉴定常用方法

第二节　中成药鉴定常用方法

一、定性鉴别

（一）性状鉴别

性状鉴别系指依据中成药的形状(剂型)、颜色、气味等进行鉴别。如牛黄解毒丸为黄棕色大蜜丸，有冰片香气，味微甜而后苦、辛；七厘散为朱红色至紫红色的粉末或易松散的块状，气香，味辛、苦，有清凉感；复方丹参片除去糖衣后片心呈褐色，气芳香，味微苦。中成药的质量标准中，往往性状与其内在质量有密切的联系，不能忽视。

（二）显微鉴别

凡以中药材原粉入药的中成药制剂，如丸、散、膏、丹、片、锭、胶囊等剂型，均可以应用显微鉴别法进行定性分析。

1.材料处理

(1)散剂、胶囊剂　用刀尖或牙签挑取少量粉末，根据要求装片观察。

(2)片剂　刮取全切面或用乳钵研碎取样装片。

(3)水丸　用乳钵研成粉末后取少量样品直接透化装片。

(4)蜜丸　将药丸切开，从切面中央挑取少量装片，或按四分法刮取不同部位装片。必要时还可配合用水溶解蜜丸，过滤干燥后装片或将蜜丸切碎，加水搅拌洗涤后，置离心管中离心分离沉淀，如此反复处理除去蜂蜜后透化装片。

2.制片方法　一般采用斯氏液或蒸馏水装片观察淀粉粒；用水合氯醛液加热透化后观察细胞组织特征；用70%乙醇装片或水合氯醛装片不加热观察菊糖。观察时依据所查疑似药的具体情况进行必要的显微化学反应。

3.中成药显微鉴别要点

(1)了解剂型制法，熟悉组方药材　中成药显微鉴别与中药材粉末显微鉴别相比要复杂得多，因为中成药一般多由二味以上中药材采用多种方法制备而成。制备方法的不同对显微鉴别会产生一定的影响，而且组成药物及各种辅料的显微特征还可能会出现相互影响和干扰。在对中成药鉴别前，首先要尽可能地了解该药的剂型和制法，分析可能检出的药物有多少。例如牛黄解毒丸中的8味药都是原粉入药，均可检出。在牛黄解毒片中，黄芩、桔梗、甘草3味药为煎汁投料，这些药便看不到各自的显微特征，不能检出。还有些药材，虽有煎汁投料，但专属性特征未被全部过滤掉，仍能检出，如银翘解毒片中的淡豆豉等。故应视具体情况做具体分析，不可一概而论。

中成药常含有多种稀释剂、崩解剂、黏合剂、包衣剂、着色剂等辅料，因此也会对显微鉴别产生一定的影响，但只要熟悉它们的显微特征，即可排除干扰。如中成药中常用的蜂蜜均含有花粉粒，镜下易与组成药物的花粉粒交叉。蜂蜜的种类主要有枣花蜜、油菜蜜、荆条蜜、洋槐蜜及紫云英蜜，其花粉粒的显微特征见表19-1。在使用野蜜的情况下，由于蜜源植物种类很多，鉴别时可参照《中国植物花粉形态》。赋形剂中常用淀粉的种类有玉蜀黍、木薯、小麦、米及马铃薯，其显微特征可参见表19-2。

表19-1　常见蜂蜜中花粉粒的显微特征

表19-2　赋形剂中常用淀粉的显微特征

对于组成药物的显微特征，可分出熟悉的、基本熟悉的和不熟悉的3类，只有熟悉之后，方可灵活应用。对于不熟悉的特征，必须先对照原药材粉末进行研究，寻找、确定主要鉴别特征以便鉴定。

(2)排除交叉干扰，明确专属性特征　在对各组成药物粉末分析比较时，应分析处方，选取各药在中成药中的专属性特征，作为鉴别依据。因此，单一药材粉末的主要特征在成药中有时不一定能作为鉴别依据，而某些较次要的特征有时则可起到鉴别作用。选取各组成药物显微特征时要考虑到两点：一是所选特征在该处方中的专属性；二是该特征尽可能在处方外的中成药中也要有专属性。一般来说，每味组成药选取1个能代表该药的专属特征即可，如果该特征与其他组成药有类似组织、细胞，内含物或赋形剂有交叉，则应选取其他特征。如果改换其他特征亦较难时，可考虑增加1～2个辅助性特征，但要本着少而精的原则，避免繁乱。例如，杞菊地黄丸由熟地黄、山茱萸、牡丹皮、山药、茯苓、泽泻、枸杞子、菊花8味药组成，每味药都有数个显微特征，大部分特征又有横向类别的交叉(表19-3)。如处方中，茯苓的菌丝与团块、熟地黄中的具核状物的薄壁组织、山茱萸中的壁连珠状增厚的外果皮细胞、菊花的花粉粒、枸杞子的种皮石细胞、泽泻含具纹孔域的薄壁细胞，均有较强的专属性。牡丹皮中成排的草酸钙簇晶是常见的特征，山茱萸亦含少量类似簇晶，但后者皱缩的含晶细胞呈橙棕色，与牡丹皮清楚的无色含晶细胞不同，可以区别。淀粉粒是山药粉末的主体，为避免与泽泻、牡丹皮淀粉粒的交叉，可选取直径大于25μm者，因后二者的淀粉粒均小于25μm。为了提高鉴别的准确度，山药还应增加针晶束为辅助特征。这样，8味组成药物均可鉴别。

表19-3　杞菊地黄丸鉴别要素一览表

●主要鉴别特征；○辅助鉴别特征；△其他特征。

(3)熟练正规操作，确保结果准确　显微鉴别与一般的仪器分析方法相比，受主观因素影响较大，对操作者来说，不仅要有扎实的中药鉴定学理论基础，还要有娴熟的显微观察技能及摄影技术。实验时，每个样品应制备5枚标准片，先重点观察后，再纵向扫描观察30行，每次观察幅宽约0.5mm(有的显微镜可通过自动移动装置控制)。一般可在400倍下照相记录。含细胞后含物较多者，制片静置一周后应复查制片的稳定性。

关于各种显微特征的量度测定，一般应取20个测量平均值，力求客观。因此，在中成药中显微特征的量度值与药材原粉中测量的数值不一定完全相同，但大都在原粉末量度值范围内。还应指出的是，中成药的显微鉴别，分为已知组成样品和未知组成样品两类，以上所及仅为已知处方的样品。至于未知组成样品的鉴别，难度相应增大，但只要掌握大量的单味药粉末显微特征，积累丰富的鉴别经验，同样可以逐步解决。鉴别时，为方便观察，还应考虑多种手段的应用。如冰片等粉末显微特征不易确定的组成药材，可用微量升华的方法来解决等。

（三）理化鉴别

中成药理化定性鉴别(包括含量测定)首先应考虑鉴别对象的选择，除单方制剂外，中药复方制剂应选择其中的君药、臣药、毒剧药及贵重药。选用的鉴别方法应具备专属性强、灵敏度高、方法简便的特点，并应制备阴性对照液平行试验。下面就《中国药典》常用的方法作一简单介绍。

1.一般分析法　主要有呈色反应、沉淀反应、升华法、荧光法等。如十五味沉香丸、七厘散采用了呈色反应鉴别法；九一散采用了沉淀反应鉴别法；万应锭、小儿化毒散采用了升华法；天王补心丸采用了荧光分光光度法进行鉴别。

2.仪器分析法　《中国药典》主要应用了薄层色谱法、气相色谱法、高效液相色谱法等。如2015年版《中国药典》中采用薄层色谱法以橙皮苷作对照品检测二陈丸中的陈皮，以西红花为对照药材检测二十五味珊瑚丸中的西红花，采用气相色谱法用桉油精作对照品检测十滴水软胶囊中的桉油，用薄荷脑、冰片与水杨酸甲酯作对照品检测少林风湿跌打膏中薄荷脑、冰片与水杨酸；采用高效液相色谱法用黄芩苷作对照品检测小儿热速清口服液中的黄芩，用维生素D2作对照品检测龙牡壮骨颗粒中维生素D2等。

二、含量测定

含量测定用供试品液，要根据中成药的不同剂型、待测定成分的理化性质来决定其提取、分离、纯化方法。在不同的剂型中其提取、分离、纯化方法可能完全不同，样品溶液的制备方法亦不尽相同。例如欲进行马钱子中士的宁生物碱的定量分析，马钱子存在于酊剂中，样品应先蒸去乙醇和水，再根据生物碱的性质特点，按生物碱通性选择提取、分离方法。存在于丸剂之中则应考虑大量蜂蜜的存在对提取分离操作的影响。首先要加硅藻土作为稀释剂，研匀，干燥后，碱化，用有机溶剂将生物碱提取出来，再进一步分离；散剂中可在酸性或碱性条件下以有机溶剂提取；在软膏中则应在酸性条件下加入有机溶剂除去基质后，再按生物碱的性质提取分离。

常用的提取方法有冷浸法、连续回流提取法和超声波提取法。提取液经纯化分离后测定，纯化方法要能除去对测定有干扰的杂质，而以不损失欲测定的成分为原则。纯化分离的方法设计主要依据欲测定成分和杂质在理化性质上的差异，同时结合与所要采用的测定方法的要求。常用的纯化方法有液-液萃取法、沉淀法、蒸馏法、色谱法等。样品经提取、纯化与杂质分离后，一般测定总成分的含量(如总生物碱、总黄酮、总皂苷)即可进行。但欲测定总成分中某单一成分的含量，则还应进行分离。中成药成分复杂，在没有有效的分离方法以前，要准确定量测定其中单一成分，常遇到很多困难。应用色谱方法分离测定中药制剂中的化学成分，目前已趋于成熟，高效液相色谱、高效薄层色谱、气相色谱定量等常能在较短时间内将几种或十几种成分分离并定量测定。

中成药有效成分的含量测定是中成药内在质量控制的重要方法，常以含量测定结果评价产品的优劣。中药制剂组成复杂，大多数中药制剂的有效成分还不十分清楚，因而有效成分的含量测定尚不能完全普遍应用。在实际工作中主要有以下几种情况：

1.对有效成分明确的中药制剂要进行有效成分的含量测定，例如元胡止痛片具有明显而持久的镇痛作用，其主要镇痛成分为延胡索总碱和延胡索乙素，因此应分别对延胡索总碱和延胡索乙素的含量进行测定。采用可见分光光度法测定小儿宝泰康颗粒中总生物碱的含量，规定每1g含总生物碱以贝母素甲计，不得少于0.15mg。采用原子吸收光谱法测定龙牡壮骨颗粒中钙的含量，规定每袋含钙(Ca)不得少于45.0mg。采用薄层扫描法测定清胃黄连丸中盐酸小檗碱的含量，每丸不得少于22mg。采用高效液相色谱法测定八珍丸中芍药苷的含量，水蜜丸每1g不得少于0.64mg，大蜜丸每丸不得少于3.6mg。采用气相色谱法测定麝香祛痛搽剂樟脑的含量应为每1mL含樟脑25.5～34.5mg。

2.中药制剂中某些药材，大致明确有效成分，如生物碱、黄酮、挥发油、皂苷等，要求测定这些成分的总量。采用紫外-可见分光光度法测定独一味胶囊中总黄酮，以芦丁计，每粒不得少于26mg。采用挥发油测定法测定正骨水挥发油的含量，规定不得少于9.5%。采用重量法测定地奥心血康胶囊中甾体总皂苷，以甾体总皂苷元计，每粒不得少于35mg。

3.中药制剂中含有剧毒性成分则要测定其含量，例如含马钱子、生川乌、草乌的制剂必须测定其有毒成分的含量，同样一些毒性较大的动物药，如斑蝥、蟾酥等成分亦应测定其含量。如采用薄层扫描法测定马钱子散中士的宁的含量，规定每袋含士的宁应为7.2～8.8mg；采用分光光度法测定风湿骨痛胶囊中乌头碱的含量，规定每粒含乌头总生物碱以乌头碱计，应为0.25～0.80mg。

4.贵重药材如西洋参、人参、牛黄、麝香在制剂中投料量应加以测定，以便确定制剂的质量优劣。如采用高效液相色谱法测定龟龄集中人参皂苷Rg1、人参皂苷Re的总量，每粒含红参以人参皂苷Rg1和Re总量计不得少于60μg。

5.选择在原料加工炮制中，或制备、贮藏过程中易损失、破坏的成分进行含量或限度测定。例如冰片易挥发损失，且多由于用量较少，又与其他药物不易混合均匀，因此在含有冰片的中药制剂中有必要测定其含量。如采用气相色谱法测定冠心苏合丸中冰片的含量，规定每丸含冰片应为80.0～120.0mg。

总之，中药制剂的组成复杂，含量变异性较大，在选定含量测定对象问题上首先要进行处方分析，除首选君药或臣药分析外，同时还要看所测定的成分能否代表单一药材，如两味药材共有的成分，则不应选其作为评价质量优劣的指标，如黄连与黄柏，枳实与枳壳，若测定其中小檗碱和辛弗林，则无法确证某一药材存在的真实量及保证所投料的数量和质量。

三、浸出物测定

对于有效成分或指标性成分不清楚的中成药，无法进行含量测定，但当浸出物的指标能相对控制中成药的质量时，可进行浸出物的测定。另外，如含量测定项所测含量值甚微时，应同时建立浸出物测定项。

根据浸出用溶剂的不同，主要有醇溶性浸出物的测定和醚溶性浸出物的测定。如九味羌活丸、龟龄集测定挥发性醚浸出物分别不得少于0.30%、0.25%。七厘散测定醇溶性浸出物不得少于60.0%；刺五加片测定醇溶性浸出物每片不得少于80mg。肾炎消肿片测定水溶性浸出物不得少于90mg。