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食品中大黄酚和橙黄决明素的测定BJS 201916
（见：2019年10月18日国家市场监督管理总局公告2019年第46号，市场监管总局关于发布《食品中大黄酚和橙黄决明素的测定》等2项食品补充检验方法的公告）
范围 本方法规定了食品（含保健食品）中大黄酚和橙黄决明素的高效液相色谱测定方法。 本方法适用于饮料、代用茶等食品及片剂、胶囊、颗粒剂、口服液等剂型的保健食品中大黄酚和橙黄决明素的含量测定。 原理 试样经甲醇回流提取后，再以稀盐酸水解，二氯甲烷萃取，采用配有二极管阵列检测器或紫外检测器的高效液相色谱仪检测，外标法定量。 试剂和材料 除另有说明外，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T
6682规定的一级水。 3.1 试剂 3.1.1甲醇（CH3OH)：色谱纯。 3.1.2
乙腈（C2H3N）：色谱纯。 3.1.3磷酸（H3PO4）。 3.1.4二氯甲烷（CH2CL2）。 3.1.5 盐酸（HCL）。 3.1.6
无水乙醇（CH3CH2OH）。 3.1.7乙酸乙酯（C4H8O2）。 3.1.8
甲酸（CH2O2）。 3.2 试剂配制 3.2.1
磷酸水溶液（0.1%）：取磷酸（3.1.3）1.0mL，加水定容至1000mL。 3.2.2
稀盐酸：取盐酸（3.1.5）234mL，用水溶解并定容至1000mL。 3.2.3
无水乙醇-乙酸乙酯（2+1）混合溶液：取无水乙醇500mL与乙酸乙酯250mL，混匀。 3.2.4甲酸水溶液（0.1%）：取甲酸（3.1.8）1.0mL，加水稀释并定容至1000mL。 3.3 标准品 橙黄决明素、大黄酚的标准品的分子式、相对分子量、CAS登录号见附录A表A.1。橙黄决明素的纯度≥98%，大黄酚的纯度≥99%。 3.4 标准溶液配制 3.4.1
标准储备液(100μg/mL)：分别称取大黄酚、橙黄决明素（3.3）各0.0100g（精确至0.0001g），置100mL棕色量瓶中，用无水乙醇-乙酸乙酯（2+1）混合溶液（3.2.3）溶解并稀释至刻度，摇匀，制成浓度为100μg/mL的标准储备液，0～4℃冷藏保存，有效期6个月。 3.4.2混合标准中间液（20μg/mL）：分别准确吸取大黄酚、橙黄决明素标准储备液(100μg/mL)(3.4.1)各5mL，置同一25mL棕色量瓶中，用无水乙醇-乙酸乙酯（2+1）混合溶液（3.2.3）稀释至刻度，摇匀。0～4℃冷藏保存，有效期1个月。 3.4.3
混合标准工作液：分别准确吸取不同体积的混合标准中间液，用无水乙醇-乙酸乙酯（2+1）混合溶液（3.2.3）稀释成一系列标准工作液，该标准系列中大黄酚和橙黄决明素浓度为0.2μg/mL、0.5μg/mL、2.0μg/mL、4.0μg/mL、10.0μg/mL 、20.0μg/mL。临用新制。 仪器和设备 4.1
高效液相色谱仪：配有二极管阵列检测器或紫外检测器。 4.2
超声波清洗器。 4.3
高速万能粉碎机。 4.4
分析天平：感量分别为0.01g和0.01mg。 4.5
电热恒温水浴锅。 4.6
旋转蒸发仪。 4.7
氮吹仪 1 分析步骤 5.1 试样制备 5.1.1 固态试样或半固态试样 取适量固态试样（代用茶及片剂、胶囊内容物、颗粒剂等保健食品）混匀，研细，或取适量半固态试样（软胶囊内容物）混匀，称取0.5g～1g（精确至0.001g），置平底烧瓶中，加入甲醇50mL，混匀，称定重量，加热回流1h，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密吸取续滤液25mL于平底烧瓶中，蒸干（或氮吹至干），加入稀盐酸（3.2.2）30mL，超声2min，加热回流水解1h，立即冷却，置于分液漏斗中，先用少量水洗涤烧瓶，再用少量二氯甲烷洗涤烧瓶，并入分液漏斗中，酸液再用二氯甲烷振摇提取4次，用量依次为40mL、30mL、30mL、20mL，合并二氯甲烷液，减压回收溶剂至干，残渣用无水乙醇-乙酸乙酯（2:1）混合溶液（3.2.3）溶解，转移至25mL容量瓶中，定容至刻度，溶液经0.45µm有机系微孔滤膜滤过，取续滤液，根据实际浓度适当稀释至标准曲线线性范围内，备用。
5.1.2 液态试样 全文附：食品中大黄酚和橙黄决明素的测定 （BJS 201916）.doc
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