含乳饮料及其乳原料中酪蛋白含量的测定BJS 201915

含乳饮料及其乳原料中酪蛋白含量的测定BJS 201915

（见：2019年10月17日国家市场监督管理总局公告2019年第45号，市场监管总局关于发布《食品中柑橘红2号的测定》等4项食品补充检验方法的公告）

1 范围

    本方法规定了含乳饮料及其原料中酪蛋白四种亚型αs₁-酪蛋白、αs₂-酪蛋白、β-酪蛋白、κ-酪蛋白含量测定的方法。

    本标准适用于含乳饮料及其原料中酪蛋白总含量的测定，不适用于发酵法、酶解法、水解法等工艺对蛋白质改性的样品。

2 原理

试样溶液中的酪蛋白采用等电点沉淀后复溶，用胰蛋白酶进行酶解，同时加入同位素内标，C₁₈水相柱分离，采用液相色谱-串联质谱仪检测，内标法定量。 

3试剂和材料

除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的一级水。

3.1试剂

3.1.1 浓盐酸（HCl）。

3.1.2 甲酸（CH₂O₂）：质谱级。

3.1.3 醋酸（CH₃COOH）：色谱级。

3.1.4 氯化钠（NaCl）。

3.1.5 乙腈（CH₃CN）：质谱级。

3.1.6 三羟甲基氨基甲烷（Tris，C₄H₁₁NO₃）。

3.1.7 聚乙二醇辛基苯基醚 （Triton X-100, C₃₄H₆₂O₁₁）。

3.1.8 胰蛋白酶（Trypsin，C₆H₁₅O₁₂P₃）：质谱级，猪源、牛源、基因工程来源均可；建议采用基因工程级的胰蛋白酶以降低杂酶的影响。

3.2 试剂配制

3.2.1 盐酸溶液（6 mol/L）：吸取25 mL 浓盐酸，用水稀释并定容至50 mL。

3.2.2 甲酸溶液（10% V/V）：吸取1 mL甲酸，用水稀释并定容至10 mL。

3.2.3 醋酸溶液（0.3% V/V）：吸取0.3 mL醋酸，用水稀释并定容至100 mL。

3.2.4 氯化钠溶液 （0.5 mol/L，含0.2% Triton-X 100）：称取14.625 g，加200 mL水溶解后，加入1 mL Triton X-100（3.1.7），混匀溶解后，用水定容至500 mL。

       全文附：含乳饮料及其乳原料中酪蛋白含量的测定（BJS 201915）.doc