5.3 基质标准溶液制备 称取5个经质谱确认不含柑橘红2号的阴性样品于50mL离心管中，加入一定浓度的柑橘红2号的中间溶液，得到柑橘红2号含量为20ng、50ng、100ng、200ng、400ng的基质样品，其余按5.2步骤操作完成。其中阴性样品按照5.2步骤操作完成后，上机测试，不含有柑橘红2号。 5.4 仪器参考条件 5.4.1 液相色谱参考条件 a) 色谱柱：C18柱（粒径1.7 µm, 75 mm× 2.1 mm），或性能相当者； b) 流动相：A为0.1 %甲酸水溶液（3.2.3），B为乙腈（3.1.1），梯度洗脱条件见表1； c) 进样体积：2.0μL； d) 流速：0.30mL/min； e) 柱温：40℃； 表1 流动相及梯度洗脱条件
5.4.2 质谱参考条件 a）离子源：电喷雾离子源（ESI源），正离子模式； b）监测方式：多反应监测（MRM）； c）毛细管电压：3.0kV； d）脱溶剂气温度：500℃； e）离子源温度：150℃； f）脱溶剂气流速：850L/h； g）锥孔气流速：150L/h； h）碰撞气（Ar）流速：0.12mL/min； 柑橘红2号的定性、定量离子对、驻留时间及碰撞能量见表2。 表2 柑橘红2号的质谱参考条件
注：* 定量离子 5.4.3 定性测定 在相同试验条件下测定试样和基质标准溶液，若样品溶液中检出色谱峰的保留时间与基质标准溶液中目标物色谱峰的保留时间一致（变化范围在±2.5%之内），且样品溶液的质谱离子对相对丰度与浓度相当基质标准溶液的质谱离子对相对丰度相比较，相对离子丰度的相对偏差不超过表3规定的范围，则可判定样品中存在该组分。 表 3 定性时相对离子丰度的最大允许偏差
5.4.4 定量测定 将基质标准溶液注入液相色谱-串联质谱仪测定，得到柑橘红2号的峰面积。以基质标准溶液浓度为横坐标，以柑橘红2号定量离子的峰面积为纵坐标，绘制标准工作曲线。将试样溶液（5.2）按仪器参考条件（5.4）进行测定，得到相应的试样溶液的色谱峰面积，根据校正曲线得到试样溶液柑橘红2号的浓度。试样溶液中目标物响应值若高于校正曲线线性范围，应稀释后进行分析。 在上述色谱和质谱条件下，柑橘红2号的标准溶液多反应监测质量色谱图参见附录A。 5.5 空白试验 除不加试样外，均按上述步骤进行操作。 6 分析结果的表述 |
