食品中辛基酚等5种酚类物质的测定BJS 201913

食品中辛基酚等5种酚类物质的测定BJS 201913

（见：2019年10月17日国家市场监督管理总局公告2019年第45号，市场监管总局关于发布《食品中柑橘红2号的测定》等4项食品补充检验方法的公告）

1 范围

本标准规定了食品中辛基酚、正辛基酚、壬基酚、正壬基酚、双酚A的液相色谱-串联质谱测定方法。

本标准适用于婴儿配方食品、畜肉、禽蛋、水产品、罐头食品、植物油中辛基酚、正辛基酚、壬基酚、正壬基酚、双酚A的测定。

2原理

试样中加入同位素内标后，经乙腈提取，离心，取上清液经固相萃取柱净化，采用液相色谱-串联质谱仪测定，内标法定量。

3试剂和材料

除另行规定外，本实验所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的一级水。

3.1 试剂

3.1.1 甲醇（CH₃OH）：质谱级。

3.1.2 乙腈（CH₃CN）：质谱级。

3.1.3 氨水（NH₄OH）：色谱级。

3.2 试剂配制

0.05% 氨水溶液（V/V）：取氨水（3.1.3）0.5mL用水稀释至1000 mL。

3.3 标准品

辛基酚、正辛基酚、壬基酚、正壬基酚、双酚A标准物质和辛基酚-13C₆、正辛基酚-D₁₇、壬基酚-13C₆、正壬基酚-D₄、双酚A -D₄同位素内标的中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子量见附录A表A.1，纯度≥98%。

3.4 标准溶液配制

3.4.1标准储备溶液（100 mg/L）：分别称取辛基酚、正辛基酚、壬基酚、正壬基酚和双酚A标准物质（3.3）10 mg（精确至0.000 1 g），用甲醇（3.1.1）溶解，并转移至100 mL容量瓶中，定容至刻度，标准储备液浓度为100 mg/L。溶液转移至试剂瓶中，贮存于-20 ℃冰箱中，有效期12个月。

3.4.2混合标准中间溶液（1 mg/L）：分别准确吸取辛基酚、正辛基酚、壬基酚、正壬基酚和双酚A标准储备液(100 mg/L)(3.4.1) 1 mL至100mL容量瓶中， 用甲醇定容至刻度，摇匀，制成1 mg/L的混合标准中间溶液，溶液转移至试剂瓶中，置于4 ℃冰箱中保存，有效期3个月。

3.4.3同位素内标标准储备溶液（100 mg/L）：分别称取辛基酚-13C₆、正辛基酚-D₁₇、壬基酚-13C₆、正壬基酚-D₄、双酚A -D₄同位素内标（3.3）10 mg（精确至0.000 1 g），用甲醇（3.1.1）溶解，并转移至100 mL容量瓶中，定容至刻度，标准储备液浓度为100 mg/L。溶液转移至试剂瓶中，贮存于-20 ℃冰箱中，有效期12个月。

3.4.4同位素内标混合标准中间溶液（1 mg/L）：分别准确吸取辛基酚-13C₆、正辛基酚-D₁₇、壬基酚-13C₆、正壬基酚-D₄、双酚A -D₄同位素内标标准储备液(100 mg/L)(3.4.3)各1 mL至100 mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，摇匀，制成1 mg/L的混合标准中间溶液，溶液转移至试剂瓶中，置于4 ℃冰箱中保存，有效期3个月。

3.4.5 同位素内标混合标准工作液（100 μg/L）：分别准确吸取同位素内标标准储备液(1 mg/L)(3.4.4)各1 mL至10mL容量瓶中， 用甲醇定容至刻度，摇匀，制成100 μg /L的混合标准工作液。临用时配制。

3.4.6混合标准工作溶液：分别准确吸取混合标准中间液 (1 mg/L)(3.4.2)适量，加入同位素内标混合标准中间溶液（1 mg/L）(3.4.4)，使辛基酚、正辛基酚、壬基酚、正壬基酚和双酚A浓度分别为0.5 μg/L、1 μg/L、5 μg/L、10 μg/L、20 μg/L和50 μg/L的混合标准系列工作溶液。临用时配制。

3.5 材料

固相萃取小柱（官能化聚苯乙烯/二乙烯苯萃取柱）：200 mg，6 mL。

4 仪器和设备

4.1高效液相色谱-串联质谱仪，配电喷雾（ESI）离子源。

4.2天平：感量分别为0.001g和0.000 1 g。

4.3涡旋混合器。

1. 离心机：转速≥8000 r/min。

   4.5 超声波清洗器。

5 分析步骤

5.1  试样制备

5.1.1 乳粉、米粉：试样混合均匀，密封并标明标记，于-20℃冰箱冷藏保存。

5.1.2 禽蛋：取代表性试样约200 g，去壳后用组织匀浆机搅拌均匀，装入洁净容器中，密封并标明标记，于-20 ℃冰箱中冷藏保存。

5.1.3水产品、畜肉：取代表性试样约200 g，用匀浆机匀浆均匀，装入洁净容器中，密封并标明标记，于-20 ℃冰箱中冷藏保存。

5.1.4 植物油：试样混合均匀，装入洁净容器中，密封并标明标记，于-20 ℃冰箱中冷藏保存。

5.1.5 罐头食品：取罐头中固形物试样约50 g, 用匀浆机匀浆均匀，装入洁净容器中，密封并标明标记，于-20 ℃冰箱中冷藏保存。

冷藏保存后的样品解冻后需再次经匀浆机均质后使用。

5.2 提取

准确称取1 g（精确至0.001 g）样品于15 mL具塞玻璃试管中，加入0.1mL同位素内标混合标准工作液（100 μg/L）(3.4.5) 和5 mL乙腈（3.1.2），涡旋混匀，超声提取15 min，8000 r/min离心5 min，取上层乙腈相；残留部分再用5 mL 乙腈重复提取一次，合并乙腈相，置冰箱-20℃冷冻2h，取出于8000 r/min离心5 min，取上清液待净化。

5.3 净化

取固相萃取柱（3.5），使用前用18 mL甲醇活化，6mL水平衡。将5.2项所得上清液加30 mL水稀释,充分摇匀后以1 mL/min~2 mL/min 的速度上样，弃去滤液，用12 mL60 %甲醇水溶液（V/V）淋洗，弃去淋洗液，再用6 mL乙腈洗脱，