3.3 标准溶液的配制 3.3.1喹诺酮类物质标准储备液（1 mg/mL）：分别精密称取喹诺酮类参考物质（3.2）适量，置于50 mL烧杯中，加入适量甲醇（3.1.6）超声溶解后，用甲醇转入10 mL容量瓶中，定容至刻度，摇匀，配制成浓度为1 mg/mL的喹诺酮标准储备液。-20℃避光保存，有效期6个月。 3.3.2喹诺酮类物质标准中间液（1 μg/mL）：分别吸取喹诺酮类标准储备液（1 mg/mL）（3.3.1）100 μL于100 mL容量瓶中，用甲醇（3.1.6）稀释至刻度，摇匀，配制成浓度为1 μg/mL的喹诺酮类标准中间液。 3.4 材料 3.4.1 金标微孔（含胶体金标记的特异性抗体）。 3.4.2 试剂条或检测卡。 4 仪器和设备 4.1 移液器：100 μL、200 μL和1 mL。 4.2 涡旋混合器。 4.3 离心机：转速≥4000 r/min。 4.4 电子天平：感量为0.01 g。 4.5 孵育器：可调节时间、温度，控温精度±1℃。 4.6 读数仪。 4.7 氮吹仪。 4.8 环境条件：温度15℃～35℃，湿度≤80%（采用孵育器与读数仪时可不要求环境温度）。 5 分析步骤 5.1 试样制备 液体乳直接用于测定，猪肉、猪肝、猪肾用组织捣碎机等搅碎后备用。 5.2 试样的提取 5.2.1 生乳、巴氏杀菌乳、灭菌乳 分别吸取同等体积的液体乳样品与稀释液混合后为待测液。 5.2.2 猪肉、猪肝、猪肾 准确称取2.5±0.01 g均质后的组织样品于15 mL离心管中，加入5 mL甲酸-乙腈溶液（3.1.5），涡旋混合1 min，振荡5 min，4000 r/min离心5 min。将上清液2 mL转入10 mL 离心管中，分别加入0.6 g分散固相萃取剂I(3.1.3)漩涡混合1 min、再加入0.6 g分散固相萃取剂II(3.1.4)后漩涡混合1 min，静置分层后取1 mL于10 mL 离心管中，于氮吹仪60℃吹干后用1 mL样品稀释液溶解作为待测液。 3.3 测定步骤 5.3.1 检测卡测定步骤 5.3.1.1将检测卡平放入孵育器中。小心撕开检测卡的薄膜至指示线处，避免提起检测卡和海绵。 5.3.1.2用移液器取待测液（5.2）300 μL，避免产生泡沫和气泡。竖直缓慢的滴加至检测卡两侧任意一侧的凹槽中，将粘箔重新粘好。 5.3.1.3盖上孵育器的盖子，孵育器上的计时器自动开始计时，红灯闪烁，孵育3 min。 5.3.1.4
取出检测卡，不要挤压样品槽，放于读数仪中，读数前保持样品槽一端朝下直到在读数仪上读取结果，或从孵育器上取出后直接目视法进行结果判定。 5.3.2试剂条与金标微孔测定步骤 吸取300 μL待测液（5.2）于金标微孔（3.4.1）中，抽吸5～10次使混合均匀，将试剂条（3.4.2）吸水海绵端垂直向下插入金标微孔中，孵育5～8 min，从微孔中取出试剂条，进行结果判定。 注：试剂条（或检测卡）具体检测步骤可参考相应的说明书操作。 5.4 质控试验 每批样品应同时进行空白试验和加标质控试验。 5.4.1 空白试验 称取空白试样，按照5.2和5.3步骤与样品同法操作。 5.4.2 加标质控试验 准确称取空白试样（精确至0.01 g）置于具塞离心管中，加入一定体积的诺氟沙星标准中间液，使诺氟沙星终浓度为6
μg/kg，按照5.2和5.3步骤与样品同法操作。 |
