食品中玉米赤霉烯酮快速检测胶体金免疫层析法(KJ201913) （见：2019年9月27日市场监管总局公告2019年第41号即关于发布《保健食品中西地那非和他达拉非的快速检测 胶体金免疫层析法》等13项食品快速检测方法的公告）
1.
范围 本标准规定了食品中玉米赤霉烯酮快速检测胶体金免疫层析法。 本标准适用玉米、小麦及其碾磨加工品中玉米赤霉烯酮快速筛选测定。
第一法 比色法 2.
原理 本方法采用竞争抑制免疫层析原理。样品中的玉米赤霉烯酮经提取后与胶体金标记的特异性抗体结合，抑制抗体和试纸条中检测线（T线）上的抗原结合，从而导致检测线颜色深浅的变化。通过检测线（T线）与控制线（C线）颜色深浅的比较，对样品中玉米赤霉烯酮进行结果判定。 3.
试剂及材料 除另有规定外，本方法所用试剂均为分析纯，试验用水为GB/T 6682规定的二级水。 3.1. 试剂 3.1.1.
乙腈。 3.1.2.
甲醇+水（7+3，体积比）。 3.1.3.
稀释缓冲液（胶体金免疫层析检测试剂盒专用提取液或根据产品使用说明书配置）。 3.2. 参考物质 玉米赤霉烯酮的中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子量见表1，纯度≥95%。 表1 玉米赤霉烯酮参考物质的中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子量
注：或等同可溯源物质。 3.3. 标准溶液的配制 3.3.1. 标准储备液：称取适量标准品，用乙腈（3.1.1）溶解，配制成浓度为100 μg/mL的标准储备液。﹣18
℃避光保存，有效期6个月。 3.3.2. 标准工作液：准确量取标准储备液（100
μg/mL）（3.3.1）100 μL，置于10 mL容量瓶中，用乙腈（3.1.1）稀释至刻度，摇匀，制成浓度为1 μ稀/mL的玉米赤霉烯酮标准工作液，2 ℃～8 ℃避光保存，有效期1个月。 3.4. 材料 玉米赤霉烯酮胶体金免疫层析试剂盒，适用基质为玉米、小麦及其碾磨加工品。 4.
仪器和设备 4.1. 移液器：100 μL、200
μL、1 mL和5 mL。 4.2. 旋涡混合器。 4.3. 离心机。 4.4. 电子天平：感量为0.01
g。 5.
环境条件 环境温度：20 ℃～30 ℃。 空气相对湿度：最佳测定湿度45 %～65 %。若湿度低于45 %，相应延长待测液-试纸条反应时间，以质控实验为准；若湿度为65 %～80 %，微孔与试纸条拆开后立即使用，避免微孔与试纸条长时间暴露在空气中受潮；避免在湿度80 %以上湿度进行实验。 6.
分析步骤 6.1. 试样制备 按GB
5491扦取的样品充分碾磨或粉碎混匀，过40目筛。 6.2. 提取 准确称取试样5.0 g（精确至0.01 g）于50 mL离心管中，加入20 mL 甲醇+水溶液（3.1.2），用旋涡混合器振荡3 min，离心分层或静置分层，上清液备用。 准确移取0.8 mL稀释缓冲液（3.1.3）于1.5 mL离心管中，加入25 μL上清液，混匀，待检。 6.3. 测定步骤 依检验所需，取相应数量的金标微孔和试纸条，做好标记。吸取待检液200 μL于金标微孔中，抽吸至孔底的紫红色颗粒完全溶解，孵育10 min。将试纸条插入金标微孔中，反应3 min～5 min。 从金标微孔中取出试纸条，弃去试纸条下端的样品垫，观察显色情况，进行结果判定。（若试剂盒冷藏保存，使用前需恢复至实验环境温度。） 7.
质控试验 每批样品应同时进行空白试验和阳性质控试验，可根据检测样品量制定适宜频次的质控试验。 7.1. 空白试验 7.1.1.
试剂空白试验：除不称取试样外，均按6.2和6.3所述步骤操作。 7.1.2.
基质空白试验：准确称取空白试样，按6.2和6.3所述步骤操作。 7.2. 阳性质控试验 准确称取玉米赤霉烯酮含量为60 μg/kg的质控样，按6.2和6.3步骤操作。或准确称取空白试样，加入一定体积的玉米赤霉烯酮标准工作液（3.3.2），使玉米赤霉烯酮添加量为60 μg/kg，按6.2和6.3步骤操作。 8.
结果判定 通过对比控制C线和检测T线的颜色深浅进行结果判定。 8.1. 无效结果
8.2. 阳性结果 控制C线显色，检测T线显色比C线浅或者没有颜色，判定为阳性（见图2）。 8.3. 阴性结果
控制C线显色，检测T线显色比C线深或者一致，判定为阴性（见图2）。
8.4. 质控试验要求 空白试验结果应为阴性，阳性质控试验结果应为阳性。 |
