食用油中苯并（a）芘的快速检测胶体金免疫层析法(KJ201910)

食用油中苯并（a）芘的快速检测胶体金免疫层析法(KJ201910)

（见：2019年9月27日市场监管总局公告2019年第41号即关于发布《保健食品中西地那非和他达拉非的快速检测 胶体金免疫层析法》等13项食品快速检测方法的公告）

1　范围

本方法规定了食用油中苯并（a）芘的胶体金免疫层析快速检测方法。

本方法适用于食用油中苯并（a）芘的快速测定。

2　原理

本方法采用竞争抑制免疫层析原理。样品中的苯并（a）芘经提取后与胶体金标记的特异性抗体结合，抑制抗体和试纸条或检测卡中检测线（T线）上抗原的结合，从而导致检测线颜色深浅的变化。通过检测线与控制线（C线）颜色深浅比较，对样品中苯并（a）芘进行定性判定。

3　试剂和材料

除另有规定外，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的二级水。

3.1　试剂

3.1.1     正己烷：色谱纯。

3.1.2     乙腈：色谱纯。

3.1.3     二甲基亚砜（DMSO）。

3.1.4     NaH₂PO₄•2H₂O。

3.1.5     Na₂HPO₄•12H₂O。

3.1.6     氯化钠。

3.1.7     吐温-20。

3.1.8     氢氧化钠溶液（2 mol/L）：称取80g氢氧化钠用水溶解，并定容至1L。

3.1.9     PBST溶液：称取0.2965 g NaH₂PO₄•2H₂O、2.9 g Na₂HPO₄•12H₂O、8.76 g氯化钠与0.55 g吐温-20用水溶解并定容至1 L。

3.2　参考物质

苯并（a）芘参考物质的中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子质量见表1，纯度均≥95%。

表1 苯并（a）芘参考物质中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子质量

注：或等同可溯源物质。

3.3　标准溶液的配制

苯并（a）芘标准储备液（0.1 mg/mL）：精密称取适量苯并（a）芘标准品（3.2），置于10 mL容量瓶中，用乙腈（3.1.2）溶解并稀释至刻度，摇匀，制成浓度为0.1 mg/mL的苯并（a）芘标准储备液；或可直接购买苯并（a）芘标准储备液。0 ℃~5 ℃避光保存备用，有效期1年。

3.4　材料

苯并（a）芘胶体金免疫层析试剂盒，适用基质为食用油。

3.4.1金标微孔（含胶体金标记的特异性抗体）。

3.4.2 试纸条或检测卡。

4　仪器和设备

4.1　移液器：100 µL、1 mL、5 mL和10 mL。

4.2　涡旋混合器。

4.3　离心机：转速≥4000 r/min。

4.4　电子天平：感量为0.01 g。

4.5　氮吹仪或空气吹干仪（带温度控制）。

5　分析步骤

5.1　试样制备

取适量有代表性样品充分混匀。

5.2　试样提取和净化除脂

称取10 g油样于离心管中，加入5 mL 正己烷（3.1.1）和15 mL DMSO（3.1.3）并混合均匀。漩涡振荡2min，然后4000 r/min离心2 min。弃去上层正己烷层。加入5 mL 正己烷（3.1.1），漩涡振荡30 s，然后4000 r/min离心30 s。弃去上层正己烷层。加入10 mL 氢氧化钠溶液（2 mol/L）（3.1.8）和15 mL正己烷（3.1.1），漩涡振荡30s，然后4000 r/min离心30 s。吸取上层正己烷层于15 mL离心管，4000 r/min离心2 min。取全部正己烷层于氮吹管中，50℃氮吹或空气吹10 min，吹干后加入200μL DMSO（3.1.3）复溶，混合均匀，此为待测液。

5.3　测定步骤

    打开试纸筒，取出所需数量的红色反应微孔（取出微孔后，立即盖好桶盖，以防受潮）。往微孔中加入200 μL的PBST溶液，再加入50 μL待测液，上下抽吸5~10次至微孔试剂混合均匀，室温（20℃~25℃）反应7 min。将已做好标记的试纸条插入至上述红色微孔中，使样品垫充分进入样品中，并计时7 min。从微孔中取出试纸条，弃去试纸条下端的样品垫，进行结果判定。