水产品中氯霉素的快速检测胶体金免疫层析法（KJ201905） （见：2019年9月27日市场监管总局公告2019年第41号即关于发布《保健食品中西地那非和他达拉非的快速检测 胶体金免疫层析法》等13项食品快速检测方法的公告）
1 范围 本方法规定了水产品中氯霉素的胶体金免疫层析快速检测方法。 本方法适用于水产品中氯霉素的快速测定。 2 原理 本方法的测定以竞争抑制免疫层析原理为基础。样品中的氯霉素经有机试剂提取，固相萃取小柱净化，浓缩复溶后，氯霉素与胶体金标记的特异性单克隆抗体结合，抑制了抗体和微孔膜检测线（T线）上抗原的结合，从而导致检测线颜色深浅的变化。通过检测线与控制线颜色深浅比较，对样品中氯霉素含量进行定性判定。 3 试剂和材料 除另有规定外，本方法所用试剂均为分析纯，水为 GB/T 6682 规定的二级水。 3.1 试剂 3.1.1 正己烷。 3.1.2 丙酮。 3.1.3 乙酸乙酯。 3.1.4乙腈 3.1.5磷酸二氢钠，NaH2PO4·2H2O。 3.1.6磷酸氢二钠，Na2HPO4·12H2O。 3.1.7 氯化钠 3.1.8 复溶液：称取0.12 g磷酸二氢钠 (3.1.5)置于100 mL容量瓶中，用水溶解并稀释至刻度，制成溶液A；称取磷酸氢二钠7.16 g (3.1.6)置于100 mL容量瓶中，用水溶解并稀释至刻度，制成溶液B。取溶液A 2.8 mL、溶液B 7.2 mL、氯化钠(3.1.7)0.85 g，用水溶解并稀释至100 mL，得磷酸盐缓冲液，即为复溶液。。 3.1.9丙酮-正己烷（1+9）：丙酮（3.1.2）、正己烷（3.1.1）按体积比1：9混匀。 3.1.10丙酮-正己烷（6+4）：丙酮（3.1.2）、正己烷（3.1.1）按体积比6：4混匀。 3.2 标准物质 氯霉素标准物质的中文名称、英文名称、CAS登录号、分之式、相对分子质量见表1，纯度≥98.6%。
表1 氯霉素参考物质中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子质量
注：或等同可溯源物质。 3.3标准溶液配制 3.3.1 氯霉素标准储备液（1 mg/mL）：精密称取氯霉素标准物质（3.2）10 mg，置于10 mL容量瓶中，用乙腈（3.1.4）溶解并稀释至刻度，摇匀，制成浓度为1 mg/mL的氯霉素标准储备液。4℃避光保存，有效期6个月。 3.3.2 氯霉素标准中间液A（10 μg/mL）：精密量取氯霉素标准储备液（1 mg/mL）（3.3.1）0.1 mL，置于10 mL 容量瓶中，用乙腈（3.1.4）稀释至刻度，摇匀，制成 10 μg/mL的氯霉素标准中间液A。4℃避光保存，有效期3个月。 3.3.3 氯霉素标准工作液（0.01 μg/mL）：精密移取氯霉素标准中间液A（10 μg/mL）（3.3.2）0.01 mL分别置于10 mL容量瓶中，用乙腈稀释至刻度，摇匀，制成浓度为0.01 μg/mL的氯霉素标准工作液。临用新配。 3.4材料 3.4.1固相萃取小柱：Cleanert Silica，200 mg/6mL。LOT：0170198。 3.4.2免疫胶体金试剂盒（在2～30℃、干燥阴凉条件下保存，在产品有效期内使用）。 3.4.2.1 金标微孔。 3.4.2.2 试纸条或检测卡。 4 仪器和设备 4.1 移液器：200 μL、1 mL和5 mL。 4.2 涡旋混合器。 4.3 离心机：转速≥4000 r/min。 4.4 电子天平：感量分别为 0.01 mg和 0.01 g。 4.5 样品浓缩仪：如有需要。 4.6 环境条件： 温度：15～25℃，相对湿度：≤60%。 5分析步骤 5.1试样制备 取具有代表性样品约500 g，充分粉碎混匀，均分成两份，分别装入洁净容器作为试样和留样，密封，标记，于常温保存。 5.2试样提取和净化 准确称取试样6 g（精确至0.01 g）置于50 mL具塞离心管中，依次加入1 mL水和8 mL乙酸乙酯（3.1.3），涡旋提取5 min，以4000 r/min离心5 min。转移全部乙酸乙酯层于50 mL具塞离心管中，加入正己烷25 mL，氯化钠1 g涡旋混匀，4000 r/min 离心1 min，上清液待净化。5 mL丙酮-正己烷（1+9）（3.1.9）淋洗LC-Si硅胶小柱，弃去淋洗液，将待净化溶液转移到固相萃取小柱上，弃去流出液，用5 mL丙酮-正己烷（6+4）（3.1.10）洗脱，收集洗脱液，洗脱液于40℃氮气吹干，精密加入600 µL复溶液（3.1.8），涡旋混合1 min，作为待测液。 |
