本指导原则旨在指导注册申请人对人细小病毒B19
IgM/IgG抗体检测试剂注册申报资料的准备及撰写，同时也为技术审评部门审评注册申报资料提供依据。 本指导原则是对人细小病毒B19 IgM/IgG抗体检测试剂的一般要求，申请人应依据产品的具体特性确定其中内容是否适用，若不适用，需具体阐述理由及相应的科学依据，并依据产品的具体特性对注册申报资料的内容进行充实和细化。 本指导原则是对申请人和审查人员的指导性文件，但不包括注册审批所涉及的行政事项，亦不作为法规强制执行，如果有能够满足相关法规要求的其他方法，也可以采用，但需要提供详细的研究资料和验证资料，相关人员应在遵循相关法规的前提下使用本指导原则。 本指导原则是在现行法规、标准体系及当前认知水平下制定的，随着法规、标准的不断完善和科学技术的不断发展，本指导原则相关内容也将适时进行调整。 人细小病毒B19 IgM/IgG抗体检测试剂是指基于抗原抗体反应原理，采用免疫层析法、酶联免疫法和化学发光法等检测技术，对来源于血清或血浆等人体样本中的B19 IgM/IgG抗体进行体外定性检测的试剂。其临床预期用途为：结合临床表现和其他实验室指标，可用于急性及慢性人细小病毒B19感染的辅助诊断及免疫状态的评估和急性及慢性感染患者抗体的血清学转换的判定。 人细小病毒B19（parvovirus B19，简称B19病毒）属于细小病毒科（Parvoviridaefamily），红病毒属（Erythrovirusgenus），无包膜，是单链线状DNA病毒。可以被分为1、2、3三种基因型，其中1型和3型又各自分为两种亚型。B19病毒感染在人群中普遍存在，可通过呼吸道、血液、胎盘等进行传播，并且可在各年龄段中发生，尤其在孕妇和儿童中多见。易感人群还包括免疫功能缺陷或者不全的患者及贫血患者。儿童感染后最常引发传染性红斑；免疫力正常人群感染后一般为轻型自限性症状；孕妇感染可造成胎儿水肿和贫血，严重时导致胎儿死亡；先天免疫缺陷患者、获得性免疫缺陷患者、肿瘤或器官移植手术后进行化疗的患者感染会导致慢性贫血症；镰状细胞贫血症等血液系统疾病患者感染会发生一过性再生障碍性危象而导致急性贫血；部分感染患者会出现关节疼痛等症状，随后演变为多发性关节炎。 病毒血症的后期阶段，特异性IgM抗体开始出现。IgM抗体出现后可持续约5个月或者更久，对B19病毒特异IgM进行检测可用于近期感染和疾病的早期诊断。B19病毒感染后约第15天，开始出现特异性IgG抗体，持续数月甚至终生。B19病毒有两种衣壳蛋白VP1和VP2，一个非结构蛋白NS1。其中VP1和VP2组成衣壳包裹在B19病毒DNA表面，构成B19病毒的抗原性。针对结构蛋白VP1和VP2构象性表位的IgG抗体可维持高滴度数月，并长期存在体内，对该类IgG抗体进行检测可用于既往感染的诊断和流行病学调查研究。 不同人群感染B19病毒后产生不同强度的免疫应答反应。健康成年人感染B19病毒后抗体反应非常强，能检测到高滴度的特异性IgM抗体。B19病毒感染后在免疫功能正常儿童可产生特异性抗体，发病后数日可检出IgM，持续数月。当患有溶血性贫血儿童感染B19病毒并发生再障危象时，IgM抗体反应特别强。此外，慢性血液病患者、免疫缺陷或抑制患者，有时缺乏可检测到的抗体反应。 B19病毒感染检测的常用方法有血清学抗体检测、核酸检测以及抗原检测，其中B19病毒血清学抗体检测是目前B19病毒感染临床辅助诊断和流行病学调查研究的主要方法，用于对传染性红斑患者、或有B19病毒感染者接触史、不明原因发热、关节痛症状的高危对象进行检测。血清学抗体检测常应用于母体出现B19病毒感染临床症状、有可疑或确诊的B19病毒感染暴露史以及发现胎儿贫血后的情况。如怀疑孕妇有B19病毒接触史以及发现胎儿存在贫血的症状，建议尽早对母体血液中B19病毒的IgM和IgG抗体进行检测，联合使用B19病毒DNA检测、超声检查以及持续观察有无胎儿水肿或贫血等手段，用于妊娠期B19病毒感染的辅助诊断以及免疫状态的评价。 鉴于母体感染细小病毒B19不能作为胎儿感染的证据，并且大多数妊娠期急性细小病毒B19感染无不良妊娠结局的发生，本类试剂不用于孕期B19病毒感染的产前筛查。即该类产品不用于对母体以及胎儿无细小病毒B19相关症状的人群进行检测。 二、注册申报资料要求 （一）综述资料 综述资料主要包括产品预期用途、产品描述、有关生物安全性的说明、研究结果的总结评价以及同类产品上市情况介绍等内容。建议申请人对以下几方面内容进行着重介绍： 1.临床适应症背景情况 描述B19病毒的生物学特征、流行病学特征、抗体的分布情况（浓度水平、产生和消失的时间等）、易感人群、感染后的临床表现和相关疾病、现有的临床诊断方法或其他实验室检查方法等。 2.同类产品上市情况 从技术方法及预期用途等方面写明申报产品与现行临床诊断方法以及目前市场上已获批准的同类产品之间的主要异同点。 （二）主要原材料研究资料 由于B19病毒不同的抗原（VP1或VP2）以及表位（线性或构象）类型对于IgM/IgG抗体的检出能力不同；因此在选择产品原料时，应注重上述抗原以及表位的选择，避免抗原或者表位的差异造成的假阴性。原材料研究资料中应详述此方面的考虑。另外，建议加入产品校准品。 1.试剂盒所用病原体抗原 首先应详述确定该抗原作为主要原材料的依据，此外应提交抗原来源、制备、筛选、鉴定及质量标准（蛋白纯度、浓度、功能性试验等）等详细试验资料。 主要包括以下两种情况： 1.1企业自制抗原 如为天然抗原，则应对B19病毒毒株选择、培养、抗原提取、纯化、鉴定等实验过程予以详述。如为重组抗原，则应提交有关特定基因选择、序列信息，克隆构建及转化，抗原表达及纯化、鉴定等详细资料。 1.2企业外购抗原 应详述抗原的名称，抗原生物学来源，供应商名称，提交供应商选择的研究资料及供应商出具的抗原性能检验报告。 2.其他主要原辅料 应提交各种原辅料的选择及验证资料，如固相载体、硝酸纤维素膜、化学发光剂、反应缓冲液等，应详述确定该原辅料作为主要原辅料的依据，说明每一原辅料的供应商名称，提交供应商出具的每一原辅料性能指标及检验报告，详述申请人对每一原辅料技术指标要求并提交检验数据。免疫层析方法学的产品如适用于全血，应介绍血细胞去除方式及相关原材料，并验证去除效果。 3.试剂盒质控品（如有） 应包括原料来源、质控品制备、阴阳性确认等研究资料。质控品至少包含阴性和弱阳性两个水平，阳性质控品可选择临床阳性样本，阴性质控品可选择临床阴性样本或样本稀释液。免疫层析方法学应详述质控线相关原材料（例如羊抗鼠IgG多克隆抗体）的选择依据和质量标准。 4.企业参考品 应提交企业参考品的原料选择、制备、阴阳性及浓度/滴度确认等相关验证资料，说明参考品阴阳性及浓度/滴度确认的方法或试剂（建议采用国内已上市的、临床上普遍认为质量较好的同类试剂）。B19病毒 IgG 抗体的量值单位可以IU/ml表示。企业参考品的基质应与待测样本相同。对于同时检测IgM和IgG抗体的试剂，应对IgM和IgG抗体分别设置企业参考品。建议如下： 4.1阳性参考品和阴性参考品 阳性参考品应考虑B19病毒 IgM/IgG 抗体检出能力的验证，可选择多份确认为阳性的临床样本，并设置不同滴度水平。阴性参考品应考虑检测特异性的评价，纳入类风湿因子、ToRCH病原体（弓形虫、风疹病毒、巨细胞病毒及单纯疱疹病毒）以及人类免疫缺陷病毒特异性抗体阳性样本。 4.2检测限参考品 可为参考物质或临床阳性样本的系列稀释样本，其中应包含检测限水平。 4.3精密度参考品 至少包括弱阳性水平参考品。 （三）主要生产工艺及反应体系的研究资料 1.主要生产工艺介绍，可用流程图方式表示，并简要说明主要生产工艺的确定依据。 2.产品基本反应原理介绍。 3.包被工艺研究，申请人应考虑如包被液量、浓度、时间等指标对产品性能的影响，通过试验确定上述指标的最佳组合。 4.显色（发光）系统、酶作用底物等的介绍。 5.实验体系反应条件确定：申请人应考虑反应时间、反应温度、洗涤次数等条件对产品性能的影响，通过试验确定上述条件的最佳组合。 6.酶催化底物（发光或变色）的最适条件研究。 7.体系中样品加样方式及加样量确定：申请人应考虑样品加样方式、加样量对产品检测结果的影响，通过实验确定最佳的加样方式及加样量。如样本需采取稀释或其他必要的方法进行处理后方可用于最终检测，申请人还应对可用于样本稀释的基质或处理方法进行研究，通过试验确定最终选择的用于样本稀释的基质或处理方法。 8.对于IgM抗体检测试剂，如采用间接法，建议考虑高浓度特异性IgG对结果的影响，合理设置IgG去除相关样本处理步骤（例如采用含有IgG吸附剂的样本稀释液等），或者详述产品设计中采用的避免IgG对IgM检测结果造成影响的合理措施。 （四）分析性能评估资料 企业应提交在产品研制或成品验证阶段对试剂盒进行的所有性能验证的研究资料，包括具体研究方法、验收标准、试验数据、统计分析方法等详细资料。对于本类产品建议着重对以下分析性能进行研究。IgM抗体、IgG抗体应分别研究。 1.适用的样本类型 如果试剂适用于多种样本类型，应采用合理方法评价每个样本类型的适用性。对于可比样本（如血清、血浆），可采用同源比对的方法进行验证；对于不可比样本，应对每个样本类型分别进行性能评估。 2.最低检测限 确定：建议选取特定滴度的特异性抗体阳性样本梯度稀释进行最低检测限确定。建议设置多个浓度梯度，每个浓度重复检测不少于3次，以100%可检出的最低浓度水平作为预设检测限。在此浓度附近制备若干浓度梯度样品，每个浓度至少重复检测20次，将具有95%阳性检出率的最低浓度作为最低检测限。 验证：选择具有时间和区域特征性的至少3个临床样本（与最低检测限确定不同样本）在最低检测限浓度水平进行验证，应达到95%阳性检出率。 采用的稀释液应与适用样本类型的基质一致，可采用阴性样本进行稀释。同时应提供详细的抗体类型和滴度的确认方法及验证结果。 3.包容性验证 选择中国境内来源于不同地域、不同人群的不少于30份B19病毒抗体弱阳性的患者样本进行研究。制备方式可为临床阴性样本作为基质稀释阳性样本，样本性质的确认方法可为临床诊断结果或已上市同类产品检测结果。如有条件，尽量纳入不同B19病毒基因型的患者样本进行验证。
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