人参养荣丸中拟人参皂苷F11检查项补充检验方法等3项补检法

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国家药监局关于发布人参养荣丸中拟人参皂苷F11检查项补充

检验方法等3项补充检验方法的公告（2021年第72号）

     根据《中华人民共和国药品管理法》及其实施条例的有关规定，《人参养荣丸（大蜜丸、小蜜丸、水蜜丸）中拟人参皂苷F11检查项补充检验方法》《风痛安胶囊中马兜铃酸I成分检查项补充检验方法》和《阿归养血糖浆中牛皮源成分检查项补充检验方法》经国家药品监督管理局批准，现予发布。
　　特此公告。
　　附件：1.人参养荣丸（大蜜丸、小蜜丸、水蜜丸）中拟人参皂苷F11检查项补充检验方法
　　　　　2.风痛安胶囊中马兜铃酸I成分检查项补充检验方法
　　　　　3.阿归养血糖浆中牛皮源成分检查项补充检验方法
　　                                                                           国家药监局
　　                                                                       2021年5月21日
                                                

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    人参养荣丸（大蜜丸、小蜜丸、水蜜丸）中
拟人参皂苷F11检查项补充检验方法
（BJY 202104）

     【检查】拟人参皂苷F11 照高效液相色谱法（中国药典2020年版通则0512）和质谱法（中国药典2020年版通则0431）测定。
色谱、质谱条件与系统适用性试验  以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（色谱柱内径2.1mm）；以乙腈-四氢呋喃-20mmol/L甲酸铵溶液（22.5:2.5:75）为流动相，流速为0.3ml/min；采用质谱检测器，电喷雾负离子模式（ESI-），进行多反应监测（MRM），选择m/z 845.5→799.5和m/z 845.5→161.0作为检测离子对。取对照品溶液，进样5μl，按上述离子对测定的MRM色谱峰的信噪比均应大于10:1。取拟人参皂苷F11对照品和人参皂苷Rf对照品适量，加50%甲醇制成每1ml各含0.6μg的混合溶液，进样5μl，按m/z 845.5→799.5测定的拟人参皂苷F11和人参皂苷Rf的色谱峰的分离度应大于1.5。
     对照品溶液的制备  取拟人参皂苷F11对照品适量，精密称定，加50%甲醇制成每1ml含0.6μg的溶液，即得。
供试品溶液的制备  取本品水蜜丸适量，研碎，取约1.5g，精密称定；或取重量差异项下的小蜜丸或大蜜丸，剪碎，混匀，取约2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入水10ml，密塞，超声处理（功率500W，频率53kHz）15分钟，并时时振摇使其溶散，再精密加入甲醇10ml，密塞，称定重量，超声处理（功率500W，频率53kHz）1小时，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
     测定法  分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5μl，注入高效液相色谱-质谱联用仪，测定，记录色谱图。
     判定原则  （1）供试品的提取离子流色谱中，未同时出现与对照品溶液色谱相应的色谱峰，视为未检出；（2）供试品的提取离子流色谱中，同时出现与对照品溶液色谱相应的色谱峰，且供试品色谱中m/z 845.5→799.5的色谱峰面积值不大于对照品溶液中相应的峰面积值，视为未检出；（3）供试品的提取离子流色谱中，同时出现与对照品溶液色谱相应的色谱峰，且供试品色谱中m/z 845.5→799.5的色谱峰面积值大于对照品溶液中相应的峰面积值，视为检出。
     结果判定  供试品的提取离子流色谱中，应不得检出与对照品溶液色谱相应的色谱峰。
     起草单位：上海市食品药品检验研究院
     复核单位：天津市药品检验研究院
                     苏州市药品检验检测研究中心

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风痛安胶囊中马兜铃酸I成分检查项补充检验方法
（BJY 202105）

     【检查】马兜铃酸I  照高效液相色谱法（中国药典2020年版通则0512）和质谱法（中国药典2020年版通则0431）测定。
      色谱、质谱条件与系统适用性试验  以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（色谱柱内径为2.1mm）；以乙腈为流动相A，以0.1%甲酸溶液（含5mmol/L甲酸铵）为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱，流速为每分钟0.2ml；采用质谱检测器，电喷雾正离子模式（ESI+），进行多反应监测（MRM），选择m/z 359.0→298.0和m/z 359.0→296.0为检测离子对。取对照品溶液，进样1μl，按上述离子对测定的MRM色谱峰的信噪比均应大于10:1。

                                     时间（分钟）   流动相 A（%）   流动相B（%）  
                                    0~15             35→40            65→60  
                                         15~28            40→65            60→35  
                                         28~30                65→95             35→5

      对照品溶液的制备  取马兜铃酸I对照品适量，加甲醇制成每1ml含2μg的对照品溶液，即得。
      供试品溶液的制备  取本品约1.0g，精密称定，置于具塞锥形瓶中，精密加入70%甲醇25ml，称定重量。超声提取（功率500W，频率40kHz）40分钟，放冷至室温，用70%甲醇补足减失重量，摇匀，静置，取上清液滤过，取续滤液，即得。
      测定法  分别吸取对照品溶液和供试品溶液各1μl，注入高效液相色谱-质谱联用仪，测定，记录色谱图。
      结果判定  供试品色谱中应不得检出与对照品色谱中马兜铃酸I色谱峰相一致的色谱峰（方法检出限为2pg）。
      起草单位：甘肃省药品检验研究院
      复核单位：河北省药品医疗器械检验研究院

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阿归养血糖浆中牛皮源成分检查项补充检验方法
（BJY 202106）

     【检查】牛皮源成分  照高效液相色谱法（中国药典2020年版通则0512）和质谱法（中国药典2020年版通则0431）测定。
      色谱、质谱条件与系统适用性试验  以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（色谱柱内径2.1mm）；以乙腈为流动相A，以0.1%甲酸溶液为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱，流速为每分钟0.3ml；采用质谱检测器，电喷雾正离子模式（ESI+），多反应监测（MRM），选择m/z641.3（双电荷）→726.2和m/z 641.3（双电荷）→783.3作为检测离子对。取牛皮源成分参比溶液，进样5μl，按上述离子对测定的MRM色谱峰的信噪比均应大于10:1。


                                                 时间（分钟）    流动相A（%）   流动相B（%）
                                                      0~25           5~20                  95~80
                                                      25~40         20~50                80~50


     牛皮源成分参比溶液的制备  取黄明胶对照药材0.10g，精密称定，置50ml量瓶中，加1%碳酸氢铵溶液40ml，超声处理30分钟，加1%碳酸氢铵溶液稀释至刻度，摇匀。精密量取上述溶液5ml，置100ml量瓶中，并加入阿胶对照药材粉末0.20g，加1%碳酸氢铵溶液稀释至刻度，摇匀，用0.22μm微孔滤膜滤过，取续滤液100μl，置微量进样瓶中，加胰蛋白酶溶液（取序列分析级胰蛋白酶，加1%碳酸氢铵溶液制成每1μl中含1μg的溶液，临用新制）10μl，摇匀，37℃恒温酶解12小时，即得。
     供试品溶液的制备  取阿归养血糖浆6.25g，精密称定，置50ml量瓶中，加1%碳酸氢铵溶液40ml，超声处理30分钟，加1%碳酸氢铵溶液稀释至刻度，摇匀，自“用0.22μm微孔滤膜滤过”起，照牛皮源成分参比溶液的制备方法同法操作，即得。
     测定法  分别吸取牛皮源成分参比溶液与供试品溶液各5μl，注入高效液相色谱-质谱联用仪，测定，即得。
     判定原则  （1）供试品的提取离子流色谱中，未同时出现与参比溶液色谱相应的色谱峰，视为未检出；（2）供试品的提取离子流色谱中，同时出现与参比离子质荷比（m/z）数值溶液色谱相应的色谱峰，且供试品色谱中m/z 641.3（双电荷）→726.2的色谱峰面积值不大于参比溶液中相应的峰面积值者，视为未检出；（3）供试品的提取离子流色谱中，同时出现与参比溶液色谱相应的色谱相应的色谱峰，且供试品色谱中m/z 641.3（双电荷）→726.2的色谱峰面积值大于参比溶液中相应的峰面积值者，视为检出。
    结果判定  供试品的提取离子流色谱中，应不得检出与参比溶液色谱相应的色谱峰。
    起草单位：湖北省药品监督检验研究院
    复核单位：广东省药品检验所