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发表于 2024-3-22 18:00:28
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GB 5009.255-2016 食品安全国家标准 食品中果聚糖的测定
食品安全国家标准
食品中果聚糖的测定
1范围
本标准规定了食品中果聚糖含量的离子色谱法测定方法。
本标准适用于乳及乳制品、婴幼儿配方食品、婴幼儿谷类辅助食品、固体饮料、配制酒中单独添加的低聚果糖、多聚果糖或菊粉含量的测定。
2原理
试样经热水浸提,样液中的蔗糖经蔗糖酶水解成葡萄糖和果糖,葡萄糖和果糖经硼氢化钠还原成相应的糖醇，多余的硼氢化钠用乙酸中和。样液中的果聚糖经过果聚糖酶水解成果糖和葡萄糖,经离子色谱-脉冲安培检测器测定果糖含量,通过换算系数,折算得到果聚糖的含量。
3试剂和材料
3.1试剂
除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯,水为GB/T6682规定的一级水。
3.1.1氢氧化钠(NaOH)。
3.1.2马来酸(C4H4O4)。
3.1.3蔗糖酶:来源于酵母 ,酶活力≥300 U。
3.1.4硼氢化钠(NaBH4)。
3.1.5冰乙酸(CH3COOH)。
3.1.6三水乙酸钠(CH3COONa·3H2O)。
3.1.7果聚糖酶:来源于黑曲霉,酶活力≥10000 U
3.1.8 50% 氢氧化钠溶液(NaOH):色谱纯。
3.1.9无水乙酸钠(CH3COONa):纯度≥99.0%。
3.1.10氮气(N2):纯度 ≥99.9%。
3.2 试剂配制
3.2.1 氢氧化钠溶液(1 mol/L):称取40 g氢氧化钠(精确至0.01 g),溶于水并稀释至1 000 mL,室温下可放置2个月。
3.2.2 马来 酸钠缓冲溶液(100 mmol/L,pH 6.5):称取1.16 g马来酸(精确至0.01 g)于150 mL烧杯中,加入约70 mL水溶解,用1 mol/L氢氧化钠溶液调节pH 6.5,用水稀释至100 mL。4 ℃保存,可放置3个月。
3.2.3 蔗糖酶溶液(4.5 U/mL):将蔗糖酶(活力为300 U)溶解于66 mL马来酸钠缓冲溶液,分装到2 mL的离心管中,一20 °C保存,可放置6个月。使用前需测定酶活力。
3.2.4 氢氧化钠溶液(50 mmol/L):称取2 g氢氧化钠(精确至0.01 g),溶于水并稀释至1 000 mL,室温下可放置2个月。
3.2.5 硼氢化钠溶液(10 mg/mL):准确称取适量硼氢化钠(精确至0.001 g)于聚丙烯离心管中,用50 mmol/L氢氧化钠溶液溶解,最终质量浓度为10 mg/mL,用时现配。
3.2.6 乙酸溶液(200 mmol/L):吸取0.6 mL冰乙酸,用水稀释至50 mL,4 °C保存,可放置2个月。
3.2.7 乙 酸钠溶液(200 mmol/L):称取1.36 g三水乙酸钠(精确至0.01 g),溶于水并稀释至50 mL,4°C保存,可放置2个月。
3.2.8 乙酸钠缓冲溶液(pH 4.5):吸取14 mL乙酸溶液和11 mL乙酸钠溶液混合,并用水稀释至50 mL,用时现配。
3.2.9 果聚糖酶溶液(455 U/mL):将果聚糖酶(活力为10 000 U)溶解于22 mL乙酸钠缓冲溶液,分装到2 mL的离心管中,-20 °C保存,可放置6个月。使用前需测定酶活力。
3.2.10 氢氧化钠溶液(200 mmol/L):取10.4 mL 50%氢氧化钠溶液,用水稀释至1 000 mL,通人氮气保护，,缓慢摇匀,室温下可放置7 d。
3.2.11 氢氧化钠(150 mmol/L)乙酸钠(500 mmol/L)混合溶液:称取41 g无水乙酸钠(精确至0.01 g),用约500 mL水溶解,0.22 μm滤膜过滤,脱气10 min,加入7.8 mL 50%氢氧化钠溶液,并用水稀释至1 000 mL,通人氮气保护,缓慢摇匀,室温下可放置7 d。
3.3 标准物质
果糖标准物质(C。H12O3):纯度≥99.0%。
3.4标准溶液的配制
3.4.1 果糖贮备溶液(2 000 mg/L) :准确称取0.05 g(精确至0.1 mg)80 °C烘干至恒重的果糖标准物质于50 mL烧杯中,加入约10 mL热水，待果糖溶解后,冷却至室温,用水稀释至25 mL容量瓶中,摇匀，4 °C保存,可放置1个月。
3.4.2 果糖中间溶液(80.0mg/L):吸取果糖贮备溶液1mL,用水稀释至25mL容量瓶中,用时现配。
3.4.3 果糖标准曲线工作溶液:取适量果糖中间溶液,用水配制成质量浓度为0.800mg/L、1.60mg/L、4.00 mg/L、8.00 mg/L、16.0 mg/L的标准曲线工作溶液。
3.5材料
3.5.1 净化柱:反相固相萃取柱,填料为苯乙烯二乙烯基苯,2.5 mL。
3.5.2 微孔滤膜:水相,0.22 μm。
4仪器和设备
4.1 离子色谱仪:配有三元及以上梯度泵,脉冲安培检测器,Au工作电极。
4.2 天平:感量为0.1 mg、0.001 g和0.01 g。
4.3 pH计:精度为0.01 pH。
4.4 旋涡振荡器。
4.5 恒温水浴摇床:控温精度士1 C。
4.6离心机:转 速≥3000 r/min。
5分析步骤
5.1 试样制备
5.1.1 试样预处理
5.1.1.1 固体样品:用“四分法”缩分至约200 g样品经粉碎机粉碎,混匀,备用。
5.1.1.2液体样 品:将试样装人能够容纳2倍试样体积的带盖容器中,摇匀,备用。
5.1.2 提取
准确称取1 g~5 g(精确至0.001 g,至少含有果聚糖5 mg)试样于150 mL锥形瓶中,加入80 °C士1 °C热水约50 mL,置于80°C士1 °C恒温水浴摇床中,150 r/min振摇15 min后,取出,冷却至室温,转移至100 mL容量瓶中,用水分三次冲洗锥形瓶,定容,摇匀,溶液经滤纸过滤或者离心,滤液或上清液依据标准曲线的线性范围确定稀释倍数,备用。
取上述备用样液200 μL于10 mL具塞玻璃试管中,估算样液中可能的蔗糖含量,按照每毫克蔗糖加入300 μL蔗糖酶溶液,旋涡振荡混匀,置于40 °C士1 °C恒温水浴摇床中,150 r/min振摇60 min后，加入300 μL硼氢化钠溶液,旋涡振荡混匀,置于40 °C士1 °C恒温水浴摇床中,150 r/min振摇30 min后,取出,冷却至室温。加入750 μL乙酸溶液,静置10 min。估算样液中可能的果聚糖含量,按照每毫克果聚糖加入1.2 mL果聚糖酶溶液,旋涡振荡混匀,置于40 °C士1 °C恒温水浴摇床中,150 r/min振摇30 min后,取出,冷却至室温。转移至10 mL容量瓶中,用水分三次冲洗玻璃试管,定容,摇匀。
活化净化柱,试样溶液依次通过0.22μm水相滤膜和净化柱,弃去前面3倍柱体积洗脱液,收集后面洗脱液待测。同时做试剂空白试验。
5.2仪器参考条件
5.2.1仪器参考条件1
5.2.1.1色谱柱:可兼容梯度洗脱的高容量阴离子交换色谱柱。
5.2.1.2淋洗液:A:水;B:氢氧化钠溶液(200 mmol/L);C:氢氧化钠(150 mmol/L)乙酸钠(500 mmol/L) 混合溶液。梯度洗脱条件见表1。
表1梯度洗脱条件 .........................................
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发表于 2019-11-20 18:31:07
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